Иммунология

Введение. Один из аспектов контроля воспаления - скоординированная работа нервной и иммунной системы. Благодаря широкому набору активационных рецепторов и медиаторов, присущих обеим системам организма, а также анатомической колокализации с нервными волокнами, тучные клетки (ТК) выступают в роли ключевых посредников между интегрирующими системами, формируя нейромастоцитарные функциональные единицы, в рамках которых происходит двунаправленное взаимодействие. Экспериментально показана иммунорегулирующая противовоспалительная роль блуждающего нерва, эффекты которого опосредованы α7-никотиновым рецептором ацетилхолина (α7-нАХР). Однако вопрос о холинергической регуляции ТК остается открытым.

Цель исследования - оценка влияния ацетилхолина (АХ) на секреторную функцию ТК.

Материал и методы. Источником ТК служили клетки перитонеального экссудата (ПТК) мыши. Оценивали дозозависимое влияние АХ (10^-4-10^-7 М) на спонтанную дегрануляцию ПТК и индуцированную анти-IgE-антителами (0,5 мкг/мл) по уровню высвобождения гистамина (метод Шора) и β-гексозаминидазы (расщепление хромогенного субстрата) через 5 и 15 мин после внесения холиномиметика. Для ингибиции связывания АХ с α7-нАХР использовали блокатор α-бунгаротоксин (10^-6 М).

Результаты. АХ вызывал дегрануляцию нестимулированных ПТК. Спустя 5 мин после внесения в культуру клеток АХ в концентрации 10^-5 М наблюдался максимальный стимулирующий секрецию эффект с повышением уровня либерации гистамина на 39 %, β-гексозаминидазы - на 47 %. В случае ПТК, предстимулированных анти-IgE-антителами, АХ, напротив, дозозависимо понижал выброс преформированных медиаторов на 20-30 %. Ингибирующий эффект АХ отменялся в присутствии α-бунгаротоксина, что позволяет предположить вовлеченность рецептора α7-нАХР в реализацию данного эффекта.

Заключение. В зависимости от исходного состояния системы в пределах нейромастоцитарной единицы АХ оказывает разнонаправленное влияние на ТК. В случае нестимулированных мастоцитов АХ способствует секреции ими преформированных медиаторов. В рамках иммунного ответа АХ, напротив, сдерживает активацию ТК, препятствуя их сливной дегрануляции.

Введение. К перспективным направлениям в создании новых антибактериальных гликоконъюгатных вакцин относятся синтез и изучение протективных препаратов со встроенным адъювантом (ВА), который может выступать агонистом Toll-подобных рецепторов (TLR), локализованных на поверхности многих иммунокомпетентных клеток, в частности макрофагов и дендритных клеток. Разработка подхода к синтезу модельных конъюгированных конструктов на основе бактериального декстрана и детоксифицированного липополисахарида (д-ЛПС) открывает возможность получения эффективных профилактических и терапевтических препаратов, содержащих в своем составе полисахаридные фрагменты бактериальной природы.

Цель исследования - синтезировать конъюгаты бактериального декстрана с д-ЛПС Shigella sonnei, связь между которыми осуществляется за счет терминального остатка D-глюкозы декстрана и аминогрупп О-специфического полисахарида д-ЛПС, а также оценить уровень специфического антительного ответа на синтезированные конъюгаты в эксперименте на мышах.

Материал и методы. Высоко- и низкомолекулярные фракции д-ЛПС S. sonnei, фаза 1 получены по описанным ранее методикам с некоторыми изменениями. Каждая стадия синтеза активированных производных декстрана и конъюгатов проведена в условиях восстановительного аминирования в присутствии цианборгидрида натрия: 1) присо­единение адипиндигидразида (АДГ) к терминальному остатку D-глюкозы в декстране; 2) введение активной альдегидной группы с помощью взаимодействия АДГ-производного декстрана с глиоксалем (ГО) и 3) конъюгация активированного АДГ-ГО-декстрана с д-ЛПС S. sonnei, фаза 1. Иммуногенность полученных препаратов оценивали по продукции специфических IgG-антител у мышей в ответ на иммунизацию синтезированными конъюгатами.

Результаты. В результате взаимодействия активированного АДГ-ГО-декстрана с высоко- и низкомолекулярными фракциями д-ЛПС S. sonnei, фаза 1, с высоким выходом получены соответствующие конъюгаты, строение которых подтверждено с помощью ЯМР- и масс-спектрометрии. Показана эффективность использования ГО для создания "мостиковых" структур при синтезе конъюгированных конструктов. Проведенное исследование уровня специфических IgG к декстрану в сыворотке крови мышей показало формирование значимого иммунного ответа в результате двукратного введения полученных конъюгатов.

Заключение. Показана возможность создания иммуногенных конъюгатов со встроенным ВА нового типа. Получены модельные конструкты, в которых в качестве "слабого" иммуногена используется бактериальный декстран, а в качестве ВА - д-ЛПС S. sonnei, фаза 1. Предполагается, что в рамках этой схемы могут быть получены иммуно­генные конъюгаты, в состав которых могут входить О-специфические полисахариды, выделенные из ЛПС, бактериальные КПС, их олигосахаридные фрагменты, а также синтетичес­кие олигосахариды.

Введение. Роль популяции В-лимфоцитов в иммунорегуляторных процессах при беременности в значительной степени может различаться на системном уровне и в плаценте в зависимости от многочисленных факторов микроокружения клеток и при наличии осложнений беременности.

Цель исследования - установить особенности дифференцировки В-лимфоцитов, локализованных в децидуальной оболочке плаценты, по сравнению с таковой в периферической крови при неосложненной беременности и при преэклампсии.

Материал и методы. Материалом для исследования служили периферическая кровь и лейкоцитарный инфильтрат децидуальной оболочки плаценты (ЛИ ДО). Обследовали 67 женщин и 21 плаценту в группе сравнения без гипертензивных расстройств во время беременности и 100 женщин и 31 плаценту в группе с преэклампсией (ПЭ). Исследования проводили методом проточной цитофлуориметрии. Уровень наивных клеток (CD27^-IgD⁺), клеток памяти (CD27⁺IgD^±), "непереключенных" (CD27⁺IgD⁺), "переключенных" (CD27⁺IgD^-) клеток памяти и плазматических клеток (CD20^-CD38⁺) оценивали в популяции CD19⁺-В-лимфоцитов; уровень CD5⁺-В1а-клеток, ИЛ-10⁺-Breg (CD20⁺ИЛ-10⁺), антиген-презентирующих HLA-DR⁺-клеток в популяции CD20⁺-В-лимфоцитов.

Результаты. В ЛИ ДО плаценты по сравнению с периферической кровью в популяции В-лимфоцитов: 1) в группе сравнения и при ПЭ уменьшался уровень Breg и "переключенных" В-клеток памяти; 2) в группе сравнения повышался уровень В1а-клеток и "непереключенных" клеток памяти, но снижалось содержание наивных клеток; 3) при ПЭ уменьшалась доля общей популяции В-клеток памяти. В отличие от группы сравнения, в ЛИ ДО при ПЭ были выше уровень CD20⁺-В-лимфоцитов, В1а-клеток и наивных В-клеток, а содержание В-клеток памяти и "непереключенных" В-клеток памяти было значимо ниже. Срок манифестации и степень тяжести ПЭ не ассоциируются с характером дифференцировки и функциональной активности децидуальных В-лимфоцитов.

Заключение. Изменения характера дифференцировки В-лимфоцитов при беременности различаются на системном уровне и в плаценте при неосложненной беременности и при преэклампсии.

Введение. Согласно существующим в настоящее время представлениям, метастазирование представляет собой результат сложного многоступенчатого процесса, который определяется взаимодействием между метастатическими клетками, опухолевым микроокружением и гомеостатическими механизмами. Большую роль в прогрессии и метастазировании меланомы играют поверхностные рецепторы, представленные на клетках опухоли. В первую очередь это относится к Толл-подобным рецепторам (Toll-like receptors, TLRs). Среди TLRs, экспрессируемых малигнизированными меланоцитами, присутствует TLR4. Это один из важнейших представителей семейства TLRs, высокая экспрессия которого на опухолевых клетках и клетках опухолевого микроокружения при различных типах рака тесно коррелирует с началом онкогенеза, прогрессированием опухоли и лекарственной устойчивостью. С другой стороны, имеются данные о подавлении роста опухоли после стимуляции липополисахаридом (ЛПС) клеток меланомы, экспрессирующих TLR4. В то же время, как было показано в ряде работ, при культивировании опухолевых клеток in vitro с детоксицированными агонистами TLRs увеличивается количество клеток, экспрессирующих TLR4, что может оказывать существенное влияние на прогрессирование опухоли и метастазирование при последующем введении этих клеток экспериментальным животным.

Наряду с TLR4 на поверхности клеток меланомы присутствует еще ряд антигенов (Аг), изменение экспрессии которых может оказывать существенное влияние на способность опухолевых клеток к метастазированию. К ним относятся рецептор хемокина CXCR4 (CD184), интегрины, рецептор для гиалуроновой кислоты (CD44) и маркер опухолевых стволовых клеток - белок CD24.

Цель исследования - изучение воздействия in vitro детоксицированного липополисахарида (Ас3-S-ЛПС) Shigella sonnei, фаза 1, на метастазирование и экспрессию клетками меланомы В16 TLR4, рецептора хемокина CXCR4 (CD184), интегрина αvβ5, рецептора для гиалуроновой кислоты (CD44), маркера опухолевых стволовых клеток - белка CD24 и белка PD-L1 (CD274) (лиганда рецептора программируемой клеточной смерти - PD-1) и MHC I.

Материал и методы. Клетки меланомы линии В16 культивировали с различными концентрациями Ас3-S-ЛПС в течение 48 ч при 37 °С в СО₂-инкубаторе и после окончания культивирования вводили внутривенно мышам линии С57Bl/6. На 21-е сутки после инокуляции опухолевых клеток животных забивали и подсчитывали количество метастазов в легких. Для определения влияния Ас3-S-ЛПС на экспрессию поверхностных Аг: хемокина CXCR4, рецептора для гиалуроновой кислоты, маркера опухолевых стволовых клеток, MHC I и белка PD-L1 клетки культивировали, а затем окрашивали моноклональными антителами (Ат), конъюгированными с флуоресцирующими красителями. Пробы анализировали на проточном цитометре. Для оценки экспрессии TLR4 и интегрина αvβ5 опухолевые клетки после культивирования с Ас3-S-ЛПС окрашивали первичными рекомбинантными поликлональными Ат к TLR4, затем вторичными Ат - антикроличьим IgG (H+L) фрагментом F(ab')2, конъюгированным с Alexa Fluor 488, и анализировали клеточные препараты под флуоресцентным микроскопом.

Результаты. Полученные результаты свидетельствуют о том, что культивирование опухолевых клеток с агонистом TLR4 (Ас3-S-ЛПС) приводит к снижению их метастатического потенциала, увеличивает количество клеток, экспрессирующих TLR4 и несущих рецептор для гиалуроновой кислоты (CD44), и снижает количество клеток, несущих CXCR4 (CD184). При этом количество клеток, экспрессирующих маркер опухолевых стволовых клеток (CD24) и интегрин αvβ5, практически не изменилось. Для образования метастазов в легких большое значение имеет присутствие на опухолевых клетках рецептора CXCR4. Изучено влияние культивирования опухолевых клеток с Ac3-S-ЛПС на экспрессию CXCR4 на клетках, несущих CD44, CD24 и PD-L1 (CD274). Установлено, что культивирование в течение 48 ч клеток меланомы линии В16 с Ac3-S-ЛПС привело к снижению количества клеток, экспрессирующих CD184⁺/CD44⁺, и практически не оказало влияния на количество клеток, несущих CD184⁺/CD24⁺ и CD184⁺/CD274⁺. В то же время культивирование опухолевых клеток с Ас3-S-ЛПС привело к увеличению в популяции количества малигнизированных меланоцитов, экспрессирующих белки MHC I и PD-L1.

Заключение. Культивирование клеток меланомы линии В16 с детоксицированным ЛПС Shigella sonnei, фаза 1, приводит к снижению метастатического потенциала опухолевых клеток. Этот эффект обусловлен снижением под влиянием Ас3-S-ЛПС количества клеток, несущих CXCR4. И хотя после культивирования с агонистом количество клеток, несущих CD44⁺, увеличивается, что значительно облегчает эмиграцию клеток из первичных опухолевых узлов, отсутствие на них рецептора CXCR4 не позволяет им локализоваться в легочной ткани.

Введение. За последнее десятилетие в терапии онкологических заболеваний появились технологии c использованием Т-клеток с модифицированными T-клеточными рецепторами, которые позволяют распознавать опухолевые антигены различной природы и локализации. Для некоторых типов таких клеток была показана высокая эффективность в лечении онкологических заболеваний системы крови, однако успехи в терапии солидных опухолей все еще скромны. Применение трехмерных культур (3D) для определения механизмов действия генетически модифицированных Т-клеток дает дополнительные возможности в понимании механизмов, направленных на элиминацию солидной опухоли.

Цель - определение фенотипа и продукции цитокинов TCR-подобными CAR/CAR/TCR-T-клеток при контакте с опухолями в виде 3D-культур.

Материал и методы. TCR-подобные CAR/CAR/TCR-T-клетки получали с помощью трансдукции клеток периферической крови здоровых доноров γ-ретровирусными векторами. Фенотип полученных после трансдукции TCR-подобных CAR/CAR/TCR-T-клеток оценивали с помощью проточной цитометрии и последующего биоинформатического анализа, позволяющего выявлять различные кластеры клеток. 3D-культуры опухолевой линии клеток меланомы SK-MEL-37 получали с помощью метода "висячая капля". Продукцию цитокинов в культуре TCR-подобных CAR/CAR/TCR-T-клеток и 3D-сфероида линии меланомы SK-MEL-37 оценивали с помощью мультиплексного анализа.

Результаты. В популяции полученных после трансдукции TCR-подобных CAR/TCR/CAR-Т-клеток доминирующими являются кластеры эффекторных CD4⁺- и CD8⁺-Т-клеток. Анализ продукции цитокинов показал, что в совместной культуре модифицированных T-клеток 3D-сфероида меланомы SK-MEL-37 преобладающими противоопухолевыми механизмами являются продукция гранзимов, гранулизина и ИФН-γ.

Заключение. Трансдукция γ-ретровирусными векторами, нацеленными на антигены солидных опухолей, ведет к образованию эффекторных Т-клеток, способных к продукции цитолитических и эффекторных молекул, направленных на лизис опухолевых клеток в 3D-модели опухолевого роста и привлечение различных иммунных клеток, что делает перспективным применение Т-клеток с генетически модифицированными рецепторами для разработки клинических стратегий терапии солидных опухолей.

В-клетки - ключевые медиаторы гуморального иммунитета, являются второй после Т-клеток значимой популяцией клеток адаптивного иммунитета, играющих значительную роль при различных состояниях, включая инфекции, аллергии, аутоиммунные заболевания, трансплантацию и злокачественные опухоли. В-клетки рассматриваются как ключевые игроки в модуляции иммунного ответа при раке. В опухолевом микроокружении обнаружены различные популяции В-клеток, начиная от наивных В-клеток и заканчивая терминально дифференцированными плазматичес­кими клетками и В-клетками памяти. Они способны проявлять как противо-, так и проопухолевую активность и могут играть важную роль в иммунотерапии зло­качественных опухолей. Настоящая статья содержит обзор зарубежной и отечественной литературы, посвященной главным образом регуляторным B-клеткам и их роли в иммунном ответе на опухоль.

Агонисты паттерн-распознающих рецепторов (ПРР) вызывают устойчивые эпи­генетические и метаболические изменения в клетках системы врожденного иммунитета, приводящие к длительному увеличению отвечаемости на вторичную стимуляцию того же или других ПРР. Это состояние, известное как тренированный иммунитет, может лежать в основе неспецифического протективного действия вакцин (гетерологичной защиты от инфекций).

Пандемия COVID-19 предоставила большие возможности для проверки эффективности тренированного иммунитета как стратегии противоинфекционной защиты. Однако, несмотря на многообещающие предварительные данные, рандомизированные клинические испытания (РКИ) вакцины БЦЖ как средства профилактики COVID-19 у пожилых людей, лиц с коморбидными патологиями и работников здравоохранения дали в основном отрицательные результаты. Неуспех большинства РКИ, возможно, был обусловлен недостаточно интенсивными схемами вакцинации. Имеющиеся лабораторные данные не позволяют утверждать, что БЦЖ-индуцированная гетерологичная защита против COVID-19, наблюдавшаяся в отдельных РКИ, обусловлена именно тренированным иммунитетом. Однако состояние тренированного иммунитета может способствовать более высокой эффективности специфических антиковидных вакцин.

DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2025-46-1-86-142

DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2025-46-1-86-142

DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2025-46-1-86-142