Активность β-галактозидазы, ассоциированной с сенесцентностью, в эффекторных и регуляторных Т-лимфоцитах человека

• Матвеева Ксения Сергеевна
• Шевырев Даниил Вадимович
• Рыбцов Станислав Александрович

Резюме

Введение. Накопление сенесцентных клеток с возрастом принято считать одной из причин дисфункции различных органов и тканей при старении организма. Иммунная система участвует в элиминации сенесцентных клеток, однако сама она также подвержена старению. Для определения сенесцентного статуса клеток принято оценивать активность фермента β-галактозидазы (SA-β-Gal), которая накапливается в стареющих клетках. Однако активность SA-β-Gal в популяции лимфоцитов доноров разного возраста изучена недостаточно. Таким образом, становится актуальным вопрос использования SA-β-Gal в качестве маркера сенесцентных лимфоцитов при изучении процессов старения иммунной системы.

Цель исследования - оценка активности SA-β-Gal в популяциях Т-лимфоцитов, различающихся по наличию поверхностных маркеров активации, периферической крови доноров разного возраста.

Материал и методы. В исследовании приняли участие 20 условно здоровых доноров в возрасте 21-32 и 50-61 года. Выделенные из периферической крови мононуклеарные клетки фенотипировали при помощи антител против поверхностных маркеров, фиксировали, инкубировали с субстратом для определения активности SA-β-Gal и анализировали методом проточной цитометрии.

Результаты. Обнаружено, что субпопуляции Т-лимфоцитов, положительные по маркерам активации CD25 и HLA-DR, обладают более высокой активностью SA-β-Gal. Популяция регуляторных Т-лимфоцитов с фенотипом CD3⁺CD4⁺CD25^highCD127^low/- (CD4⁺-Treg) демонстрирует достоверно более низкую активность SA-β-Gal в сравнении с общим пулом CD4⁺-Т-клеток. При этом значимых различий в активности SA-β-Gal среди доноров двух возрастных групп не обнаружено, за исключением субпопуляций с фенотипом CD3⁺CD8⁺HLA-DR⁺ и CD3⁺CD8⁺HLA-DR⁺CD127^- (CD8⁺-Treg), где активность SA-β-Gal с возрастом была ниже.

Заключение. Нами было показано, что активированные эффекторные CD4⁺- и CD8⁺-Т-клетки обладают повышенной активностью SA-β-Gal, тогда как CD4⁺-Treg демонстрируют сниженную активность SA-β-Gal. Это, по-видимому, отражает метаболические особенности клеток данных популяций. При этом мы не выявили достоверного увеличения процентного содержания SA-β-Gal^high-клеток или увеличения ее активности с возрастом, что ограничивает использование данного метода для оценки возрастных изменений в иммунной системе. Тем не менее, активность SA-β-Gal может быть использована как дополнительный индикатор активации Т-лимфоцитов наряду с поверхностными маркерами активации у доноров исследованных возрастных групп.

Ключевые слова:SA-β-Gal; сенесцентность; Т-лимфоциты; Treg

Введение

Клеточная сенесцентность - это комплексное явление, которое связано с необратимой остановкой клеточного цикла в сочетании с устойчивостью к апоптозу [1]. Сенесцентные клетки меняются морфологически - они становятся уплощенными, с большим ядрами и дезорганизованным хроматином. Кроме того, для них характерна секреция воспалительных факторов и молекул стресса. Такой секреторный фенотип, ассоциированный с сенесцентностью (SASP), выполняет важную функцию по привлечению иммунной системы к поврежденным и состарившимся клеткам, формируя условия для их удаления и ремоделирования ткани [2-5].

Феномен клеточной сенесцентности был обнаружен при продолжительном культивировании фибробластов и связывался с репликативным истощением [6]. В настоящее время клеточную сенесцентность также рассматривают как один из противовирусных и противоопухолевых механизмов, который останавливает деление клеток с повреждением ДНК [6, 7]. При этом сенесцентность играет роль в процессах развития и репарации, что ярко выражено в эмбриональном и раннем постнатальном периодах [6, 8]. Накопление клеток с признаками сенесцентности принято считать возможной причиной общей дисфункции тканей и органов [3, 4], что со временем приводит к развитию возраст-ассоциированных патологий [10-12] и старению организма в целом [13]. Способность иммунной системы удалять такие стареющие клетки из организма с возрастом также снижается, в том числе из-за накопления старых и нефункциональных клеток в ней самой, что в свою очередь вносит вклад в ускорение общего старения организма [14].

Для оценки сенесцентного статуса клеток в условиях in vitro применяется оценка активности β-галактозидазы, ассоциированной с сенесцентностью (SA-β-Gal). Это фермент - эукариотическая β-галактозидаза (β-Gal), которая представляет собой лизосомальную гидролазу. Она катализирует реакцию гидролитического отщепления остатков β-D-галактозы с образованием β-D-галактозидов. Активность β-Gal максимальна при pH 3-5 и зависит от вида организма, органа, субстрата и используемого буфера [15]. В 1995 г. было высказано предположение о том, что стареющие клетки характеризуются экспрессией связанной со старением изоформы данного фермента, которая обладает повышенной активностью и работает в смещенном оптимуме pH = 6,0. Такая β-Gal, ассоциированная с сенесцентностью, условно была названа SA-β-Gal [16]. Позже было показано, что повышенная активность β-Gal является следствием сенесцентности и обусловлена увеличением количества этого фермента в лизосомах и цитоплазме [17], а также увеличением числа самих лизосом в клетке [18, 19]. По-видимому, это приводит к обнаружению активности β-Gal в субоптимальном pH.

Несмотря на обширный пласт работ с использованием SA-β-Gal как маркера сенесцентных клеток, сведений об активности SA-β-Gal в контексте старения различных популяций Т-лимфоцитов практически нет. Мы предположили, что активность этого фермента среди популяций Т-лимфоцитов неоднородна и может иметь возрастную динамику. Таким образом, целью данной работы стала оценка активности SA-β-Gal в различных субпопуляциях Т-лимфоцитов периферической крови доноров разного возраста.

Материал и методы

Объект исследования. В исследование были включены условно здоровые доноры младшей (23-32 года; 6 женщин и 4 мужчины) и старшей (50-61 года; 8 женщин и 2 мужчины) возрастных групп.

Критерии исключения: беременность или период лактации, наличие острого инфекционного заболевания, введение любых вакцин в течение 3 мес перед исследованием, наличие тяжелых инфекционных или соматических патологий, а также использование биологической терапии. Образцы крови и сопутствующая информация были получены от доноров после получения добровольного информированного согласия. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом (протокол заседания Комитета по биоэтике НТУ "Сириус" от 6.03.2023). Забор венозной крови производился из локтевой вены доноров в вакуумные пробирки объемом 10 мл с натрий-гепарином.

Выделение мононуклеарных клеток (МНК). Фракцию МНК выделяли из периферической крови методом дифференциального центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколла (Ficoll-Paque PLUS, Cytiva, Sweden; ρ = 1,077 г/см³). Кровь смешивали с PBS с добавлением 0,02 % ЭДТА в соотношении 1 : 1, наносили на фиколл и центрифугировали при 8 °С, 660 g в течение 30 мин. После центрифугирования интерфазное кольцо, содержащее МНК, собирали в отдельную пробирку и дважды отмывали в PBS + 0,02 % ЭДТА центрифугированием 5 мин при 300 g.

Окрашивание клеток антителами против поверхностных маркеров. Для приготовления раствора антител брали требуемый объем буфера для окрашивания (PBS + 1 % FCS) и вносили в него предварительно рассчитанные объемы меченых флуорохромами антител (табл. 1), сохраняя для конечного объема соотношение 1 - 10⁶ клеток / 100 мкл. Смесь клеток и раствора антител инкубировали 15 мин при комнатной температуре в темноте, затем клетки дважды отмывали буфером для окрашивания и разводили в требуемом объеме.

Оценку активности SA-β-Gal проводили при помощи коммерческого набора CellEvent™ Senescence Green Detection Kit (Thermo Fisher Scientific, США). Предварительно окрашенные антителами МНК (3 - 10⁶ клеток) отмывали в PBS, центрифугировали и удаляли супернатант. Затем клетки фиксировали в 300 мкл 4 % раствора параформальдегида в течение 10 мин при комнатной температуре и отмывали клетки от фиксирующего раствора. Первую отмывку проводили в 1х PBS, вторую - в 1х PBS с добавлением 1 % FCS. К клеточному осадку добавляли субстрат, разведенный в поставляемом с набором буфере (рН = 6) согласно протоколу производителя. Для оценки общей активности β-Gal как положительного контроля буфер предварительно доводили до рН = 4 при помощи 0,1 M HCl. Для негативного контроля (без добавления субстрата) клетки ресуспендировали в буфере с рН = 6 и рН = 4 соответственно. Далее клетки инкубировали в термостате при температуре 37 °С в течение 2 ч. После инкубации клетки трижды отмывали в 1х PBS и анализировали на проточном цитометре LSRFortessa (BD Biosciences, США). Количественно активность SA-β-Gal оценивали по значению MFI (Median of Fluorescence Intensity) в канале 488-530/30. Обработку и визуализацию данных проточной цитометрии осуществляли с помощью программного обеспечения FACSDiva (BD Biosciences, США) и FlowJo™ v10.10 (BD Life Sciences, США).

Методы статистической обработки данных. Статистическую обработку и визуализацию данных проводили с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 10.1.2 (GraphPad Software, Boston, Massachusetts, США). Данные выборок были представлены в виде медианы и интерквартильного интервала. Для проверки гипотезы о нормальном распределении выборки использовался критерий Шапиро-Уилка. Сравнение двух зависимых выборок, имеющих нормальное распределение, проводилось с использованием парного t-критерия Стьюдента. Для независимых выборок, не подчиняющихся нормальному распределению, использовался критерий Манна-Уитни. Множественное сравнение зависимых выборок осуществлялось с использованием смешанной модели, имплементированной в GraphPad Prism 10.1.2, с применением поправки Гринхауса-Гейзера на несферичность. Эта смешанная модель использует матрицу ковариаций составной симметрии и ограничение максимального правдоподобия (REML) для оптимизации параметров модели. В качестве фиксированного параметра уравнение модели включало фенотип популяции клеток, а в качестве случайного - номер донора. Использование случайной модели позволило провести анализ данных со случайно пропущенными значениями. Для контроля групповой вероятности ошибки первого рода была применена поправка Шидака. Данные анализировались с доверительным интервалом 95 %, а значение p < 0,05 считалось показателем значимости.

Результаты

Активность SA-β-Gal оценивали в популяциях CD4⁺-Treg (CD3⁺CD4⁺CD25^highCD127^low/-) и CD8⁺-Treg (CD3⁺CD8⁺HLA-DR⁺CD127^-), а также в субпопуляциях CD4⁺- и CD8⁺-Т-лимфоцитов, положительных и негативных по маркерам активации CD25 (CD3⁺CD4⁺CD25⁺, CD3⁺CD4⁺CD25^-, CD3⁺CD8⁺CD25⁺, CD3⁺CD8⁺CD25^-) и HLA-DR (CD3⁺CD4⁺HLA-DR⁺, CD3⁺CD4⁺HLA-DR^-, CD3⁺CD8⁺HLA-DR⁺, CD3⁺CD8⁺HLA-DR^-). Стратегия гейтирования представлена на рис. 1А.

Для изучения связанных с сенесцентностью фенотипических характеристик различных популяций Т-лимфоцитов оценивалась активность SA-β-Gal при рН = 6,0. В качестве положительного контроля общую активность β-Gal оценивали при pH = 4,0 в популяциях CD4⁺-Treg и CD8⁺-Treg, а также в общих популяциях CD4⁺- и CD8⁺-T-лимфоцитов (рис. 2А). Ожидаемо, что общая активность β-Gal при рН = 4,0 была достоверно выше, чем активность SA-β-Gal, которая оценивается при рН = 6,0, вне зависимости от возраста. Однако при рН = 4 происходило разрушение большей части клеток в образцах, что не позволяло проводить дальнейший анализ при этом условии. Поэтому далее оценивали только активность SA-β-Gal.

Популяция CD4⁺-Treg в сравнении с CD4⁺-Т-лимфоцитами демонстрирует сниженную активность SA-β-Gal (рис. 2Б). Среди субпопуляций CD8⁺-Т-лимфоцитов популяция CD8⁺HLA-DR⁺CD127⁺ обладает более высокой активностью SA-β-Gal в сравнении с CD8⁺-Т-лимфоцитами, что, по-видимому, связано с их активацией. Однако для популяции CD8⁺-Treg в сравнении с эффекторными CD8⁺-Т-лимфоцитами значимых отличий в активности SA-β-Gal не обнаружено. Между популяциями CD4⁺- и CD8⁺-T-лимфоцитов по активности SA-β-Gal также не выявлено существенных различий (рис. 2Б).

В T-лимфоцитах, положительных по маркерам активации CD25 и HLA-DR (CD4⁺CD25⁺, CD4⁺HLA-DR⁺, CD8⁺CD25⁺ и CD8⁺HLA-DR⁺), активность SA-β-Gal была достоверно выше, чем в T-лимфоцитах, негативных по маркерам активации (CD4⁺CD25⁺, CD4⁺HLA-DR^-, CD8⁺CD25^- и CD8⁺HLA-DR^- соответственно; рис. 3А, Б).

Статистически значимые различия не обнаружены при сравнении исследуемых субпопуляций между донорами двух возрастных групп (рис. 3В, Г), за исключением CD8⁺HLA-DR⁺-лимфоцитов и CD8⁺-Treg, где популяции доноров молодой группы проявляют более высокую активность SA-β-Gal. Это, по-видимому, также может быть связано с метаболическими особенностями активированных лимфоцитов молодых доноров (см. рис. 3Г).

Обсуждение

Известно, что активация различных субпопуляций Т-клеток требует запуска соответствующих метаболических программ, отвечающих определенным функциональным потребностям. При активации наивные Т-клетки быстро перестраивают свои метаболические сети, чтобы удовлетворить потребности механизмов клональной экспансии и эпигенетического ремоделирования. В данной работе было показано, что различные популяции Т-лимфоцитов обладают различной активностью SA-β-Gal. Эти различия были связаны со статусом активации клеток, который определяли по наличию поверхностных маркеров активации CD25 и HLA-DR. По-видимому, это может отражать отличия в метаболическом статусе различных популяций T-клеток. Так, наиболее высокая активность SA-β-Gal была характерна для активированных Т-лимфоцитов, тогда как CD4⁺-Treg обладали значительно более низкой активностью этого фермента. Известно, что β-Gal участвует в лизосомальной деградации ряда гликолипидов и гликопротеинов [20]. Побочные продукты деградации этих молекул способны покидать лизосомы и могут становиться участниками анаболических путей, которые в том числе задействованы в поддержании функций Т-клеток. Таким образом, активность SA-β-Gal может косвенно отражать метаболические и функциональные особенности субпопуляций Т-лимфоцитов.

Популяция CD8⁺-Treg, описываемая фенотипом CD8⁺HLA-DR⁺CD127^-, и популяция CD8⁺HLA-DR⁺CD127⁺, несмотря на наличие общего для них маркера активации HLA-DR, также имели различия в активности SA-β-Gal. Тенденция в сторону более низкой активности SA-β-Gal среди CD8⁺-Treg, вероятно, приближает эту популяцию к классическим CD4⁺-Treg, и отличает от эффекторных Т-лимфоцитов. Сниженная активность SA-β-Gal в популяциях CD8⁺-Treg и CD8⁺HLA-DR⁺-Т-лимфоцитов в старшем возрасте может отражать снижение способности этих субпопуляций к физиологически нормальной активации. При этом для остальных популяций не было обнаружено различий, ассоциированных с возрастом.

Повышение активности SA-β-Gal успешно использовалось в качестве маркера сенесцентных клеток в ряде работ конца ХХ - начала XXI в. [21-24]. В настоящее время оценка активности SA-β-Gal используется в разработке сенолитиков [25] и зондов для диагностики сенесцентности in vivo [26, 27]. Также известно, что активность SA-β-Gal существенно повышается при многих патологических состояниях, особенно при воспалении, различных дистрофиях и опухолях [22, 24, 25, 27-29]. С высокой вероятностью можно предположить, что в скором времени произойдет внедрение методов оценки активности SA-β-Gal в медицинскую практику в качестве маркеров различных патологических состояний или старения [30]. Однако использование SA-β-Gal как маркера клеточной сенесцентности на сегодняшний день имеет ряд ограничений [31-34]. β-Gal присутствует во всех клетках и может повышать свою активность в опухолях, при старении или отражать повышенный метаболизм клеток. Помимо сенесцентных клеток, повышенная активность SA-β-Gal была показана в клетках, обработанных H₂O₂ [31], в конфлюэнтных культурах нетрансфоримированных фибробластов [31] и клетках в условиях сывороточного голодания [32], при этом в последних двух случаях активность SA-β-Gal нормализовалась при пересадке клеток в новый планшет и при добавлении сыворотки соответственно [33]. Также активность SA-β-Gal наблюдается в недавно дифференцированных ганглионарных клетках при развитии сетчатки птиц [35]. Иначе говоря, активность SA-β-Gal, под которой подразумевается обнаружение активности β-Gal при рН = 6,0, может отражать повышенное содержание данного фермента в клетке [32]. Подобное наблюдается в терминально дифференцированных клетках, таких как нейроны, для которых длительная и необратимая остановка клеточного цикла, свойственная сенесцентным клеткам, является физиологичной [36]. Некоторые высокосекреторные типы клеток, такие как тканевые макрофаги, остеокласты, некоторые раковые клетки, а также клетки с повышенной лизосомальной активностью во время аутофагии, также демонстрируют повышенную активность SA-β-Gal [21, 37, 38]. Также в работе R.I. Martínez-Zamudio и соавт. продемонстрировано повышение активности SA-β-Gal с возрастом, наиболее выраженное среди CD8⁺-T-лимфоцитов. Использование авторами дополнительных маркеров и профилирования транскриптома клеток позволило охарактеризовать популяцию CD8⁺-Т-лимфоцитов с высокой активностью SA-β-Gal как клетки в состоянии сенесцентности [39]. В этой работе для оценки активности SA-β-Gal был использован субстрат, отличающийся от использованного в нашей работе. Также были взяты выборки доноров более старших возрастных групп, что, возможно, в совокупности дает более яркие возрастные различия. Таким образом, активность SA-β-Gal может быть релевантным маркером сенесцентных клеток только в случае комплексной оценки данного маркера, строгого контроля условий эксперимента, учета физиологических особенностей исследуемых клеток и оценки базового уровня экспрессии SA-β-Gal для отдельных клеточных популяций. Кроме оценки активности SA-β-Gal, необходимо изучение дополнительных маркеров сенесцентности, например p16^ink4a, p21^Cip1, факторов SASP, а также морфологических критериев [4, 40].

Таким образом, гетерогенная активность SA-β-Gal среди субпопуляций Т-лимфоцитов, вероятно, является отражением метаболических особенностей каждой популяции, но не признаком сенесцентности и дисфункции этих клеток.

Заключение

В данной работе была продемонстрирована повышенная активность SA-β-Gal в субпопуляциях CD4⁺- и CD8⁺-Т-лимфоцитов, несущих маркеры активации CD25 и HLA-DR, в периферической крови доноров разного возраста. При этом популяция конвенциональных CD4⁺-Treg обладает сниженной активностью SA-β-Gal относительно основной популяции CD4⁺-Т-лимфоцитов, что, по-видимому, также отражает метаболические особенности данной популяции. При сравнении активности SA-β-Gal между возрастными группами 23-32 и 50-61 года почти для всех исследованных популяций не обнаружено существенных различий. Это подтверждает, что активность SA-β-Gal не является достаточным маркером для определения сенесцентного статуса Т-лимфоцитов периферической крови в исследованном возрастном диапазоне. Кроме того, в данном исследовании были выявлены базовые уровни экспрессии SA-β-Gal. Это позволяет использовать данный маркер в качестве метаболического индикатора активности лизосом наряду с поверхностными маркерами активации лимфоцитов. Потенциально это может найти применение при анализе особенностей генетической регуляции и функций лимфоцитов.

Литература

1. Масютина А.М., Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Клеточное старение: механизмы и клиническое значение. Иммунология. 2024; 45 (2): 221-34. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-2-221-234

2. Valieva Y., Ivanova E., Fayzullin A., Kurkov A., Igrunkova A. Senescence-Associated β-Galactosidase Detection in Pathology. Diagnostics. 2022; 12 (10): 2309. DOI: https://doi.org/10.3390/diagnostics12102309

3. Rybtsova N., Berezina T., Kagansky A., Rybtsov S. Blood-Circulating Factors Unveil and Delay Your Biological Aging? Biomedicines. 2020; 8 (12): 615. DOI: https://doi.org/10.3390/biomedicines8120615

4. Martyshkina Y.S., Tereshchenko V.P., Bogdanova D.A., Rybtsov S.A. Reliable Hallmarks and Biomarkers of Senescent Lymphocytes. Int. J. Mol. Sci. 2023; 24 (21): 15653. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms242115653

5. Бурмакина В.В., Ганковская Л.В., Насаева Е.Д., Хасанова Е.М., Греченко В.В., Стражеско И.Д., Городищенская С.В. Связь инфламмасомного комплекса и цитокинов ИЛ-1β и ИЛ-10 с патологическим фенотипом старения у долгожителей. Иммунология. 2023; 44 (6): 754-63. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2023-44-6-754-763

6. Da Silva-Álvarez S., Collado M. Cellular Senescence. In: Encyclopedia of Cell Biology. Bradshaw R.A., Stahl P. D., eds. Waltham: Academic Press. 2016; 511-7. DOI: https://doi.org/10.1016/B978-0-12-394447-4.30066-9

7. Campisi J., d’Adda di Fagagna F. Cellular senescence: when bad things happen to good cells. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2007; 8: 729-40. DOI: https://doi.org/10.1038/nrm2233

8. Muñoz-Espín D., Serrano M. Cellular senescence: from physiology to pathology. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2014; 15: 482-96. DOI: https://doi.org/10.1038/nrm3823

9. Kirkland J.L., Tchkonia T. Clinical strategies and animal models for developing senolytic agents. Exp. Gerontol. 2015; 68: 19-25. DOI: https://doi.org/10.1016/j.exger.2014.10.012

10. Kennedy B.K., Berger S.L., Brunet A., Campisi J., Cuervo A.M., Epel E.S., Franceschi C., Lithgow G.J., Morimoto R.I., Pessin J.E., Rando T.A., Richardson A., Schadt E.E., Wyss-Coray T., Sierra F. Geroscience: linking aging to chronic disease. Cell. 2014; 159: 709-13. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2014.10.039

11. Ганковская Л.В., Артемьева О.В., Греченко В.В., Насаева Е.Д., Хасанова Е.М. Возраст-ассоциированные заболевания: роль инфламмасомного комплекса. Иммунология. 2023; 44 (5): 640-52. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2023-44-5-640-652

12. Артемьева О.В., Ганковская Л.В. Воспалительное старение как основа возраст-ассоциированной патологии. Медицинская иммунология. 2020; 22 (3): 419-32. https://doi.org/10.15789/1563-0625-IAT-1938

13. Garcia H.G., Kondev J., Orme N., Theriot J.A., Phillips R. Chapter Two - Thermodynamics of Biological Processes. In: Methods in Enzymology. Johnson M. L., Holt J. M., Ackers G. K., eds. Academic Press. 2011; 492: 27-59. DOI: https://doi.org/10.1016/B978-0-12-381268-1.00014-8

14. Borgoni S., Kudryashova K.S., Burka K., de Magalhães J.P. Targeting immune dysfunction in aging. Ageing Res. Rev. 2021; 70: 101410. DOI: https://doi.org/10.1016/j.arr.2021.101410

15. Krishna D.R., Sperker B., Fritz P., and Klotz U. Does pH 6 beta-galactosidase activity indicate cell senescence? Mech. Ageing Dev. 1999; 109 (2): 113-23. DOI: https://doi.org/10.1016/s0047-6374(99)00031-7

16. Dimri G.P., Lee X., Basile G., Acosta M., Scott G., Roskelley C., Medrano E.E., Linskens M., Rubelj I., Pereira-Smith O. A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1995; 92 (20): 9363-7. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.92.20.9363

17. Lee B.Y., Han J.A., Im J.S., Morrone A., Johung K., Goodwin E.C., Kleijer W.J., DiMaio D., Hwang E.S. Senescence-associated beta-galactosidase is lysosomal beta-galactosidase. Aging Cell. 2006; 5 (2): 187-95. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1474-9726.2006.00199.x

18. Tan J.X., Finkel T. Lysosomes in senescence and aging. EMBO Rep. 2023; 24 (11): e57265. DOI: https://doi.org/10.15252/embr.202357265

19. Carmona-Gutierrez D., Hughes A.L., Madeo F., Ruckenstuhl C. The crucial impact of lysosomes in aging and longevity. Ageing Res Rev. 2016; 32: 2-12. DOI: https://doi.org/10.1016/j.arr.2016.04.009

20. Abe A., Shayman J.A. Sphingolipid Catabolism. In: Encyclopedia of Biological Chemistry (Second Edition). Lennarz W. J., Lane M. D., eds. Waltham: Academic Press. 2013; 287-92. DOI: https://doi.org/10.1016/B978-0-12-378630-2.00462-X

21. Bursuker I., Rhodes J.M., Goldman R. Beta-galactosidase - an indicator of the maturational stage of mouse and human mononuclear phagocytes. J. Cell. Physiol. 1982; 112: 385-90. DOI: https://doi.org/10.1002/jcp.1041120312

22. Calcinotto A., Kohli J., Zagato E., Pellegrini L., Demaria M., Alimonti A. Cellular Senescence: Aging, Cancer, and Injury. Physiol. Rev. 2019; 99 (2): 1047-78. DOI: https://doi.org/10.1152/physrev.00020.2018

23. Tuttle C.S.L., Waaijer M.E.C., Slee-Valentijn M.S., Stijnen T., Westendorp R., Maier A.B. Cellular senescence and chronological age in various human tissues: A systematic review and meta-analysis. Aging Cell. 2020; 19 (2): e13083. DOI: https://doi.org/10.1111/acel.13083

24. Gao P., Zou X., Sun X., Zhang C. Cellular Senescence in Metabolic-Associated Kidney Disease: An Update. Cells. 2022; 11 (21): 3443. DOI: https://doi.org/10.3390/cells11213443

25. Bulbiankova D., Díaz-Puertas R., Álvarez-Martínez F.J., Herranz-López M., Barrajón-Catalán E., Micol V. Hallmarks and Biomarkers of Skin Senescence: An Updated Review of Skin Senotherapeutics. Antioxid. Basel Switz. 2023; 12 (2): 444. DOI: https://doi.org/10.3390/antiox12020444

26. Lozano-Torres B., García-Fernández A., Domínguez M., Sancenón F., Blandez J.F., Martínez-Máñez R. β-Galactosidase-Activatable Nile Blue-Based NIR Senoprobe for the Real-Time Detection of Cellular Senescence. Anal. Chem. 2023; 95 (2): 1643-51. DOI: https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c04766

27. Sikora E., Bielak-Zmijewska A., Dudkowska M., Krzystyniak A., Mosieniak G., Wesierska M., Wlodarczyk J. Cellular Senescence in Brain Aging. Front. Aging Neurosci. 2021; 13: 646924. DOI: https://doi.org/10.3389/fnagi.2021.646924

28. Jurk D., Wang, C., Miwa S., Maddick M., Korolchuk V., Tsolou A., Gonos E.S., Thrasivoulou C., Saffrey M.J., Cameron K., von Zglinicki T. Postmitotic neurons develop a p21-dependent senescence-like phenotype driven by a DNA damage response. Aging Cell. 2021; 11 (6): 996-1004. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1474-9726.2012.00870.x

29. Dungan C.M., Wells J.M., Murach K.A. The life and times of cellular senescence in skeletal muscle: friend or foe for homeostasis and adaptation? Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2023; 325 (1): C324-31. DOI: https://doi.org/10.1152/ajpcell.00553.2022

30. Wang L., Lankhorst L., Bernards R. Exploiting senescence for the treatment of cancer. Nat. Rev. Cancer. 2022; 22: 340-55. DOI: https://doi.org/10.1038/s41568-022-00450-9

31. Severino J., Allen R.G., Balin S., Balin A., Cristofalo V.J. Is beta-galactosidase staining a marker of senescence in vitro and in vivo? Exp. Cell. Res. 2000; 257 (1): 162-71. DOI: https://doi.org/10.1006/excr.2000.4875

32. Yegorov Y.E., Akimov S.S., Hass R., Zelenin A.V., Prudovsky I.A. Endogenous β-Galactosidase Activity in Continuously Nonproliferating Cells. Exp. Cell. Res. 1998; 243 (1): 207-11. DOI: https://doi.org/10.1006/excr.1998.4169

33. Yang N.-C., Hu M.-L. The limitations and validities of senescence associated-beta-galactosidase activity as an aging marker for human foreskin fibroblast Hs68 cells. Exp. Gerontol. 2005; 40 (10): 813-9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.exger.2005.07.011

34. Debacq-Chainiaux F., Erusalimsky J.D., Campisi J., Toussaint O. Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-βgal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo. Nat. Protoc. 2009; 4: 1798-806. DOI: https://doi.org/10.1038/nprot.2009.191

35. de Mera-Rodríguez J.A., Álvarez-Hernán G., Gañán Y., Martín-Partido G., Rodríguez-León J., Francisco-Morcillo J. Senescence-associated β-galactosidase activity in the developing avian retina. Dev. Dyn. Off Publ. Am. Assoc. Anat. 2019; 248 (9): 850-65. DOI: https://doi.org/10.1002/dvdy.74

36. de Mera-Rodríguez J.A., Álvarez-Hernán G., Gañán Y., Martín-Partido G., Rodríguez-León J., Francisco-Morcillo J. Is Senescence-Associated β-Galactosidase a Reliable in vivo Marker of Cellular Senescence During Embryonic Development? Front. Cell. Dev. Biol. 2021; 9: 623175. DOI: https://doi.org/10.3389/fcell.2021.623175

37. Young A.R., Narita M. Connecting autophagy to senescence in pathophysiology. Curr. Opin. Cell Biol. 2010; 22 (2): 234-40. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ceb.2009.12.005

38. Kopp H.-G., Hooper A.T., Shmelkov S.V., Rafii S. Beta-galactosidase staining on bone marrow. The osteoclast pitfall. Histol. Histopathol. 2007; 22: 971-6. DOI: https://doi.org/10.14670/HH-22.971

39. Martínez-Zamudio R.I., Dewald H.K., Vasilopoulos T., Gittens-Williams L., Fitzgerald-Bocarsly P., Herbig U. Senescence-associated β-galactosidase reveals the abundance of senescent CD8+ T cells in aging humans. Aging Cell. 2021; 20: e13344. DOI: https://doi.org/10.1111/acel.13344

40. Чихиржина Е.В., Поляничко А.М., Старкова Т.Ю. Внеядерные функции негистонового белка HMGB1. Цитология. 2020; 62 (10): 716-25. DOI: https://doi.org/10.31857/S0041377120100016

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)