Трансдукция В-лимфоцитов человека с помощью аденовирусных векторов различных серотипов

• Сухова Мария Михайловна
• Бязрова Мария Георгиевна
• Банделюк Алина Сергеевна
• Михайлов Артем Андреевич
• Шмаров Максим Михайлович
• Филатов Александр Васильевич

Резюме

Введение. В-клетки являются привлекательной мишенью для генной терапии. С помощью переноса генов в В-клетки можно лечить заболевания, связанные с генетически обусловленной дисфункцией В-клеток, а также лимфопролиферативные и аутоиммунные патологии. В последние годы для переноса генов все большую популярность приобретают векторы на основе аденовирусов (Ad). Этому способствуют такие свойства Ad, как высокая емкость в отношении трансгена, возможность нарабатывать вектор в высоких титрах, а также способность трансдуцировать терминально дифференцированные клетки.

Цель исследования - определить эффективность трансдукции В-клеточных линий человека, а также активированных первичных В-лимфоцитов аденовирусными векторами различных серотипов.

Материал и методы. Мононуклеарные клетки выделяли из периферической крови здоровых доноров (n = 11) с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина с дальнейшим обогащением фракции В-лимфоцитов методом отрицательной селекции с использованием магнитных микросфер. В-лимфоциты стимулировали in vitro с помощью смеси лимфокинов, в состав которой входили ИЛ-2, ИЛ-4, BAFF, ИЛ-21 и мультимеризованный CD40L. Через 24 ч стимулированные В-лимфоциты инфицировали рекомбинантными аденовирусными векторами, несущими репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка (GFP). Были протестированы 3 серотипа: Ad5, sAd23 и Ad26, а также химерный Аd5-вектор, содержавший на С-конце своего фибера соответствующий домен серотипа Ad35 (Ad5/35). Через 48 ч после инфекции определяли долю трансдуцированных клеток и среднюю интенсивность флуоресценции репортерного белка GFP. Трансдукцию определяли на четырех В-клеточных линиях: NALM-6, Ramos, IM-9 и RPMI-8226, а также на первичных В-лимфоцитах. Для сравнения с В-клетками использовали нелимфоидную линию HEK293.

Результаты. Ad в низких и средних дозах оказывали на клетки умеренное токсическое воздействие, при этом жизнеспособность оставалась не ниже 70 %. Наиболее восприимчивыми к аденовирусной инфекции проявили себя клетки RPMI-8226, у которых после трансдукции > 90 % клеток экспрессировали GFP. По этому показателю они приближались к нелимфоидным клеткам HEK293.

Наиболее устойчивыми к аденовирусной инфекции оказались клетки NALM-6 - они в некоторой степени трансдуцировались векторами Ad26 и Ad35 (65 и 66 %), незначительно - вектором sAd23 (18 %) и минимально - вектором Ad5. Клетки Ramos и IM-9 по чувствительности к инфекции занимали промежуточное положение, при этом клетки Ramos трансдуцировались несколько более успешно, чем IM-9. При сравнении различных серотипов наиболее инфекционным оказался Ad26, который даже в минимальных дозах трансдуцировал > 90 % клеток Ramos, IM-9 и RPMI-8226.

В отношении стимулированных первичных В-лимфоцитов наибольшей трансдуцирующей эффективностью обладал вектор Ad26. При дозе вируса 2000 БОЕ/клетку медианное значение доли GFP⁺-клеток составляло 35 % (межквартильный размах - 30-40 %). Несколько меньшую активность проявлял Ad5/35 (медианное значение 16 %, межквартильный размах 13-20 %). Наконец Ad5 и sAd23 имели самую низкую трансдуцирующую активность, которая устойчиво превышала пороговый уровень только при самых высоких дозах вируса (от 1000 до 2000 БОЕ/клетку).

Заключение. Серотипы Ad отличаются между собой по способности трансдуцировать В-клетки человека. Наиболее эффективную трансдукцию обеспечивает серотип Ad26. Несколько сниженной эффективностью обладает вектор Ad5, псевдотипированный фибером Ad35. Трансдукция первичных В-лимфоцитов проходит только после их активации.

Ключевые слова:аденовирусы (Ad); серотипы Ad; перенос генов; В-лимфоциты; трансдукция; GFP; стимуляция В-лимфоцитов

Введение

В-клетки представляют собой важнейшее звено адаптивного иммунитета. Они являются продуцентами антител и некоторых цитокинов. Разнообразные врожденные или приобретенные дефекты могут приводить к серьезным нарушениям в работе как самих В-лимфоцитов, так и всей системы иммунитета в целом. Эти обстоятельства делают В-клетки привлекательной мишенью для генной терапии. С помощью переноса генов в В-клетки можно будет лечить заболевания, связанные с генетически обусловленной дисфункцией В-клеток, а также лимфопролиферативные и аутоиммунные патологии [1].

Для доставки генов в В-лимфоциты применяется несколько платформ. Прежде всего это подходы, основанные на использовании ретровирусов [2], лентивирусов [3], а также аденоассоциированных вирусов [4].

В последние годы для генной терапии все большую популярность приобретают векторы на основе аденовирусов (Ad) [5]. Такие свойства, как высокая емкость в отношении трансгена, возможность нарабатывать вектор в высоких титрах, а также способность трансдуцировать терминально дифференцированные клетки делает Ad-векторы особо привлекательными для использования в терапевтических или профилактических целях [6].

В дополнение к этому рекомбинантные Ad-векторы с успехом применяются для создания вакцин против различных патогенов человека [7]. В качестве примера можно упомянуть вакцины на основе Ad для вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) [8], Эбола [9] и некоторых других вирусов. На основе этой платформы были созданы вакцины против COVID-19. Среди них можно отметить Гам-КОВИД-Вак ("Спутник V", ФГБУ "НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) [10], Ad26.COV2.S (Jcovden, Janssen) [11], Ad5-nCoV (Convidecia, CanSino) [12] и AZD1222 (Vaxzevria, AstraZeneca) [13]. Не исключено, что при аденовирусной вакцинации Ad-вирус наряду с другими типами клеток также может трансдуцировать В-лимфоциты.

Ad относятся к безоболочечным вирусам с двухцепочечной ДНК. Вирусный капсид состоит из 240 гомотримерных гексонов и 12 пентамерных пентонов, расположенных в вершинах икосаэдрического капсида. От основания каждого пентона отходят отростки - фиберы, которые определяют серотип и тропизм по отношению к вирусным рецепторам [14].

Ad являются платформой, безопасность которой была доказана в клинических исследованиях при системном и местном применении [15]. К настоящему времени известно > 100 серотипов Ad, из них > 50 встречаются у человека. Более детально изучено сравнительно небольшое число серотипов.

Аденовирусы обладают широким тканевым тропизмом и способны инфицировать клетки самого различного тканевого происхождения. В данной работе мы исследовали эффективность трансдукции нескольких В-клеточных линий человека, а также активированных первичных В-лимфоцитов под действием аденовирусных векторов различных серотипов. Полученные данные впоследствии могут использоваться при разработке методов направленной доставки трансгенов в В-лимфоциты человека.

Материал и методы

Клетки. В работе использовали перевиваемые линии клеток человека: HEK293 (клетки эмбриональной почки, трансформированные областью E1 генома Аd5), NALM-6 (клетки острого лимфобластного лейкоза), Ramos (клетки лимфомы Беркитта), IM-9 (клетки множественной миеломы) и RPMI-8226 (клетки плазмацитомы). Клетки культивировали в среде DMEM/F12 с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки, 24 мкг/мл гентамицина (все реагенты "ПанЭко", Россия). Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров выделяли центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина ("ПанЭко").

Участники исследования. В исследовании приняли участие 11 здоровых добровольцев (8 женщин и 3 мужчины, средний возраст - 25 лет, в диапазоне от 21 года до 27 лет). Исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации "Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека в качестве испытуемого". Письменное информированное согласие было получено от каждого участника исследования перед выполнением каких-либо процедур исследования. Протокол исследования был рассмотрен и одобрен этическим комитетом ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России (№ 3-1, 11 марта 2020 г.).

Стимуляция лимфоцитов in vitro. B-лимфоциты обогащали из мононуклеарной фракции крови методом отрицательной иммуномагнитной сепарации с использованием набора Dynabeads Untouched human B cell kit (Thermo Fisher Scientific, Cat. No. 11351D, США). Выделенные В-лимфоциты культивировали в среде DMEM/F12 с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки, 24 мкг/мл гентамицина, 1 мМ пирувата натрия, 10 мМ HEPES (все реагенты "ПанЭко", Россия). К клеткам добавляли стимулирующую смесь лимфокинов, которая состояла из 10 нг/мл ИЛ-21, 10 нг/мл ИЛ-4, 50 нг/мл ИЛ-2, 10 нг/мл BAFF (Peprotech, США) и 10 нг/мл mCD40L [16]. Клетки культивировали при 37 °C в 5 % CO₂.

Наработка и очистка аденовирусов. В работе были использованы рекомбинантные Ad человека серотипов Ad5, Ad26 и аденовирус обезьян sAd23. Все Ad-векторы содержали в своем составе репортерный ген GFP. Аденовекторы Ad5-GFP и sAd23-GFP получали путем трансфекции соответствующих плазмидных конструкций в клетки пакующей линии HEK293 с использованием реагента Metafectene Pro (Biontex, Германия), как описано ранее [17]. Получение химерного Аd5-вектора, содержащего фибер аденовируса человека Ad35, описано ранее [18]. Ad-вектор на основе Ad человека 26-го серотипа Ad26-GFP был любезно предоставлен канд. биол. наук О.В. Зубковой и канд. биол. наук Т.А. Ожаровской (ФГБУ "НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России).

Рекомбинантные Ad накапливали в клетках HEK293 вплоть до развития цитопатического эффекта. Далее рекомбинантные Ad очищали и концентрировали ультрацентрифугированием лизатов зараженных клеток в градиенте плотности хлористого цезия. Концентрацию Ad в очищенном препарате определяли спектрофотометрически, учитывая, что одна единица оптической плотности при 260 нм соответствует 1,12 × 10¹² вирусных частиц в 1 мл. Титр препаратов Ad определяли методом бляшкообразования на клетках линии HEK293 и выражали в единицах БОЕ.

Вирусная трансдукция. Вирусные препараты разводили в культуральной среде и готовили 6 последовательных двукратных разведений. Разведенный вирус в объеме 50 мкл добавляли в лунки, содержавшие 500 000 клеток-мишеней в объеме 200 мкл. Конечная концентрация векторов варьировала от 1,875 до 2000 БОЕ. Через 48 ч флуоресценцию трансдуцированных клеток регистрировали с помощью проточного цитометра CytoFLEX S (Beckman Coulter, США). Популяцию живых клеток определяли по бипараметрическим цитограммам в координатах прямого (FCS) и бокового (SSC) светорассеяния. Доля клеток, положительных по флуоресценции GFP, отражала эффективность трансдукции. Экспрессию репортерного гена выражали в относительных единицах при измерении средней интенсивности флуоресценции (mean fluorescence intensity, MFI). Обработку цитофлуориметрических данных проводили при помощи программы FlowJo (Becton Dickinson, США).

Статистическая обработка данных. Полученные данные обрабатывали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версия 8.4.3 (GraphPad, США). На графиках представлены медианы (столбцы), "усы" показывают 1,5-кратный межквартильный размах. Значимость различий между выборками оценивали с помощью критерия Вилкоксона.

Результаты

Трансдукция В-клеточных линий с помощью аденовирусов различных серотипов

В-клетки в своем развитии проходят несколько стадий дифференцировки. Восприимчивость к аденовирусной инфекции может зависеть от степени созревания В-клеток. Для того, чтобы оценить эту зависимость, мы изучили взаимосвязь между эффективностью трансдукции и дозой вируса для четырех В-клеточных линий, которые отличались друг от друга по степени дифференцировки. Использовали клеточные линии NALM-6, Ramos, IM-9 и RPMI-8226, которые были получены от пациентов с острым лимфобластным лейкозом, лимфомой Беркитта, множественной миеломой и плазмацитомой соответственно. Эти клетки по своей дифференцировке примерно соответствуют стадиям пре-В-лимфоцитов, В-лимфоцитов из зародышевых центров вторичных лимфоидных тканей (зрелые наивные В-клетки), а также ранних и более поздних плазмабластов соответственно. В качестве нелимфоидных клеток мы использовали культуру HEK293. Все типы клеток были протестированы на инфекцию аденовирусами четырех серотипов: Ad5, sAd23, Ad26 и Ad5/35. Эффективность трансдукции оценивали по доле GFP-позитивных клеток и по средней интенсивности флуоресценции (MFI), которые измеряли через 48 ч после инфекции. Для количественной характеристики дозы вируса мы использовали величину БОЕ/клетку, которую предварительно определяли методом бляшкообразования на клетках линии HEK293. Аденовирусы использовали в дозе от 15 до 2000 БОЕ/клетку.

Судя по данным светорассеяния, аденовирусы в низких и средних дозах оказывали на клетки умеренное токсическое воздействие, при этом жизнеспособность оставалась не ниже 70 %. При высоких дозах 1000 и 2000 БОЕ/клетку жизнеспособность заметно снижалась. Наиболее чувствительными оказались клетки IM-9, для которых при инфекции вектором sAd23 и Ad26 в дозе 2000 БОЕ/клетку жизнеспособность не превышала 40 и 10 % соответственно.

Наиболее восприимчивыми к инфекции проявили себя клетки RPMI-8226. После трансдукции > 90 % этих клеток экспрессировали GFP. По этому показателю они приближались к нелимфоидным клеткам HEK293 (рис. 1). При трансдукции с помощью векторов Ad26 и Ad35 в дозах от 250 до 2000 БОЕ/клетку уровень флуоресценции GFP выходил за пределы детекции на цитометре. Даже низкие дозы вирусов (от 15 до 250 БОЕ/клетку) обеспечивали очень высокие уровни флуоресценции клеток RPMI-8226 (рис. 2).

Наиболее резистентными к аденовирусной инфекции являлись клетки NALM-6: в некоторой степени они трансдуцировались векторами Ad26 и Ad35 (65 и 66 %), незначительно - вектором sAd23 (18 %) и минимально - вектором Ad5. Клетки Ramos и IM-9 по чувствительности к инфекции занимали промежуточное положение, при этом клетки Ramos трансдуцировались несколько более успешно, чем IM-9. При сравнении различных серотипов наиболее инфекционным оказался Ad26, который даже в минимальных дозах трансдуцировал > 90 % клеток Ramos, IM-9 и RPMI-8226. Для NALM-6 в диапазоне от 15 до 2000 БОЕ/клетку наблюдалось прямо пропорциональное увеличение GFP⁺-клеток. Ad35 по способности инфицировать клеточные культуры несколько уступал Ad26. При увеличении дозы Ad26 и Ad35 доля GFP⁺-клеток, как правило, стремилась к 100 %. В отличие от этого, при инфекции вируса Ad5 в клетки Ramos и IM-9 доля GFP⁺-клеток выходила на плато на уровне 70 и 40 % соответственно.

Трансдукция первичных В-лимфоцитов с помощью аденовирусных векторов различных серотипов

Ранее было показано, что Ad5 плохо инфицирует покоящиеся В-лимфоциты [19]. Учитывая это, в качестве клеток-мишеней мы использовали стимулированные В-лимфоциты. В-клетки выделяли из периферической крови и в течение суток стимулировали в системе CD40L/ИЛ-21. В этих условиях В-лимфоциты активируются, начинают пролиферировать и по поверхностному фенотипу приближаются к плазмабластам [16]. Аденовирусы добавляли непосредственно в культуру стимулированных В-клеток. Через 48 ч с помощью проточной цитометрии регистрировали GFP-флуоресценцию.

Цитотоксическое действие Ad на активированные В-клетки оказалось более выраженным, чем в отношении В-клеточных линий. Жизнеспособность В-клеток для всех серотипов регистрировалась на уровне от 20 до 30 %.

На рис. 3 представлена зависимость доли GFP⁺-клеток от дозы аденовирусов. В эксперименте были использованы В-клетки от 11 доноров. Наибольшей трансдуцирующей способностью обладал вектор Ad26. При дозе вируса 2000 БОЕ/клетку медианное значение доли GFP⁺-клеток составляло 35 % (межквартильный размах - 30-40 %). Несколько меньшую активность проявлял Ad5/35 (медианное значение 16 %, межквартильный размах 13-20 %). Ad5 и sAd23 имели самую низкую трансдуцирующую активность, которая устойчиво превышала пороговый уровень только при самых высоких дозах вируса (от 1000 до 2000 БОЕ/клетку). Для векторов Ad5, Ad26 и Ad5/35 трансдуцированные клетки по экспрессии GFP отчетливо отделялись от нетрансдуцированных клеток (рис. 4). Для sAd23 интенсивность флуоресценции GFP⁺-клеток была невысокой, их популяция просматривалась как плечо на пике отрицательных клеток.

Следует отметить, что трансдукция В-лимфоцитов проходила не так эффективно, как В-клеточных линий. Это проявлялось в более низкой доле трансдуцированных клеток, а также в меньшей интенсивности флуоресценции репортерного белка. Последнее отчасти можно объяснить меньшими размерами первичных В-лимфоцитов по сравнению с трансформированными В-клетками. Для всех тестированных серотипов даже при максимальных дозах вируса мы не смогли выйти на уровень плато по доле GFP⁺-клеток.

При тестировании трансдукции В-лимфоцитов под действием вектора Ad26 мы обнаружили значительную вариабельность этого параметра. Для того, чтобы выяснить, насколько эта вариабельность может отражать индивидуальные особенности конкретных доноров, для клеток двух доноров были проведены дополнительные эксперименты (n = 4); они показали отсутствие статистически значимых различий между восприимчивостью к Ad26 В-клеток этих доноров (p = 0,8438).

Обсуждение

Аденовирусные векторы отличаются высокой эффективностью трансдукции и широким спектром потенциальных клеток-мишеней. В литературе имеются отдельные упоминания о трансдукции В-лимфоцитов под действием Ad, однако эти сведения носят фрагментарный характер. Нами проведено расширенное исследование трансдукции В-лимфоцитов с помощью Ad четырех серотипов.

Теоретическая кривая зависимости доли трансдуцированных клеток от дозы вируса имеет сигмоидальную форму. При увеличении дозы вируса должно наблюдаться все более возрастающее увеличение доли трансдуцированных клеток, затем при концентрации, которую принято обозначать как TE₅₀ (Transduction efficacy), кривая проходит точку перегиба и далее выходит на плато [20].

Величина TE₅₀ - важная характеристика эффективности трансдукции, для ее определения желательно получить дозозависимую кривую в возможно более полном виде. Несмотря на то, что определение трансдукции мы проводили в широком диапазоне вирусных доз, который простирался более чем на два порядка, сигмоидальную кривую в полном виде мы наблюдали только при инфекции клеток Ramos с помощью Ad5 и Ad5/35. В остальных случаях в исследованную область концентраций попадала или только возрастающая часть кривой (инфекция клеток NALM-6 вирусом Ad26), или только область плато (инфекция клеток RPMI-8226 вирусами Ad26 и Ad5/35). Измерениям трансдукции при высоких дозах препятствовала высокая токсичность аденовирусов при концентрациях выше 2000 БОЕ/клетку.

Следует отметить, что в некоторых случаях доля трансдуцированных клеток достигала уровня плато, который был заметно ниже 100 %. Ранее уже отмечалось, что в некоторых случаях трансдукция клеток-мишеней под действием вирусных векторов наблюдается только в части клеточной популяции [21]. Этот эффект может сохраняться даже при высоком титре инфекционных векторных частиц. Подобное поведение мы наблюдали при инфекции клеток IM-9 с помощью векторов Ad5 и Ad5/35. Причины этого явления не вполне ясны. Возможные объяснения связаны с распределением клеток-мишеней по фазам клеточного цикла, а также с высокой неоднородностью экспрессии вирусных рецепторов в клеточной популяции. Это приводит к тому, что количество рецепторов, необходимое для инфекции, экспрессируется только на части популяции.

Одним из основных аденовирусных рецепторов является молекула CAR (Coxsackievirus-adenovirus receptor), которая участвует в связывании Ad5, sAd23 и Ad26. При инфекции Ad5 также могут быть вовлечены другие молекулы, в частности такие адгезионные молекулы, как VCAM-I и интегрины. Вирусные фиберы взаимодействуют с CAR и обеспечивают прикрепление к клетке Ad5. Последующая интернализация вируса происходит с участием молекул αV-интегрина [19].

CAR-рецепторы слабо экспрессируются на лимфоидных клетках [22]. Возможно, это является причиной того, что Ad5 плохо трансдуцировал В-клеточные линии и активированные В-клетки. В отличие от этого, Ad26 демонстрировал высокий уровень трансдукции В-клеток. Из этого можно сделать вывод, что для инфекции вектором Ad26 CAR-рецепторы не являются лимитирующим фактором. Действительно Ad26 также эффективно использует другие типы рецепторов, например CD46 (Membrane cofactor protein), который хорошо представлен на лимфоидных клетках [6]. Эту молекулу также использует Ad35, что хорошо соответствует полученным нами результатам по высокой трансдукции с помощью этого серотипа.

Следует отметить, что Ad-векторы по сравнению с векторами на основе аденоассоциированых вирусов более токсичны. Отчасти эта токсичность может быть связана с неполнотой очистки вирусных частиц.

Дополнительные возможности для генной терапии с помощью аденовирусов открываются при использовании модифицированных векторов. Например, в недавней работе было показано, что аденовирус человека С5, фиберы которого были модифицированы мотивом RGD, способен эффективно инфицировать В-клетки in vivo [23]. Все это создает хорошую основу для разработки новых методов терапии В-клеток с помощью аденовирусных векторов.

Заключение

Серотипы Ad отличаются между собой по способности трансдуцировать В-клетки человека. Наиболее эффективную трансдукцию обеспечивает серотип Ad26. Несколько сниженной эффективностью обладает вектор Ad5, псевдотипированный фибером Ad35. Трансдукция первичных В-лимфоцитов проходит только после их активации.

Благодарности. Благодарим канд. биол. наук О.В. Зубкову и канд. биол. наук Т.А. Ожаровскую (ФГБУ "НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) за предоставленный препарат аденовируса человека 26-го серотипа Ad26-GFP.

Литература

1. Tseha S.T. Role of adenoviruses in cancer therapy. Front. Oncol. 2022; 12: 772659. DOI: https://doi.org/10.3389/fonc.2022.772659

2. Kwakkenbos M.J., Van Helden P.M., Beaumont T., Spits H. Stable long-term cultures of self-renewing B cells and their applications. Immunol. Rev. 2016; 270: 65-77. DOI: https://doi.org/10.1111/imr.12395

3. Caeser R., Di Re M., Krupka J.A., Gao J., Lara-Chica M., Dias J.M.L., Cooke S.L., Fenner R., Usheva Z., Runge H.F.P., Beer P.A., Eldaly H., Pak H.K., Park C.S., Vassiliou G.S., Huntly B.J.P., Mupo A. Genetic modification of primary human B cells to model high-grade lymphoma. Nat. Commun. 2019; 10: 4543. DOI: https://doi.org/10.1038/s41467-019-12494-x

4. Бязрова М.Г., Михайлов А.А., Сухова М.М., Бардина М.В., Шмидт А.А., Прилипов А.Г., Филатов А.В. Трансдукция В-лимфоцитов человека с помощью аденоассоциированных вирусов различных серотипов. Иммунология. 2023; 44 (4): 443-54. DOI: https://www.doi.org//10.33029/0206-495 2-2023-44-4-443-454

5. Седова Е.С., Первойкина К.А., Щербинин Д.Н., Шмаров М.М. Генетические конструкции, выполняющие функции адъювантов, в составе вакцин на основе аденовирусных векторов. Иммунология. 2022; 43 (1): 5-17. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-5-17

6. Sharma A., Li X., Bangari D.S., Mittal S.K. Adenovirus receptors and their implications in gene delivery. Virus Research. 2009; 143: 184-94. DOI: https://doi.org/10.1016/j.virusres.2009.02.010

7. Custers J., Kim D., Leyssen M., Gurwith M., Tomaka F., Robertson J., Heijnen E., Condit R., Shukarev G., Heerwegh D., van Heesbeen R., Schuitemaker H., Douoguih M., Evans E., Smith E.R., Chen R.T. Vaccines based on replication incompetent Ad26 viral vectors: Standardized template with key considerations for a risk/benefit assessment. Vaccine. 2021; 39: 3081-101. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2020.09.018

8. Baden L.R., Walsh S.R., Seaman M.S., Tucker R.P., Krause K.H., Patel A. First-in-human evaluation of the safety and immunogenicity of a recombinant adenovirus serotype 26 HIV-1 Env vaccine (IPCAVD 001). J. Infect. Dis. 2013; 207: 240-7. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jis670

9. Gilbert S.C. Adenovirus-vectored Ebola vaccines. Expert review of vaccines. 2015; 14: 1347-57. DOI: https://doi.org/10.1586/14760584.2015.1077122

10. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukhvatulin A.I., Zubkova O.V., Dzharullaeva A.S., Kovyrshina A.V., Lubenets N.L., Grousova D.M., Erokhova A.S., Botikov A.G., Izhaeva F.M., Popova O., Ozharovskaya T.A., Esmagambetov I.B., Favorskaya I.A., Zrelkin D.I., Voronina D.V., Shcherbinin D.N., Semikhin A.S., Simakova Y.V., Tokarskaya E.A., Egorova D.A., Shmarov M.M., Nikitenko N.A., Gushchin V.A., Smolyarchuk E.A., Zyryanov S.K., Borisevich S.V., Naroditsky B.S., Gintsburg A.L. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. Lancet. 2021; 397: 671-81. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)00234-8

11. Bos R., Rutten L., Van Der Lubbe J.E.M., Bakkers M.J.G., Hardenberg G., Wegmann F. Ad26 vector-based COVID-19 vaccine encoding a prefusion-stabilized SARS-CoV-2 Spike immunogen induces potent humoral and cellular immune responses. NPJ Vaccines. 2020; 5: 91. DOI: https://doi.org/10.1038/s41541-020-00243-x

12. Zhu F.-C., Li Y.-H., Guan X.-H., Hou L.-H., Wang W.-J., Li J.-X. Safety, tolerability, and immunogenicity of a recombinant adenovirus type-5 vectored COVID-19 vaccine: a dose-escalation, open-label, non-randomised, first-in-human trial. Lancet. 2020; 395: 1845-54. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31208-3

13. Voysey M., Clemens S.A.C., Madhi S.A., Weckx L.Y., Folegatti P.M., Aley P.K. Safety and efficacy of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine (AZD1222) against SARS-CoV-2: an interim analysis of four randomised controlled trials in Brazil, South Africa, and the UK. Lancet. 2021; 397: 99-111. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)32661-1

14. Havenga M.J., Lemckert A.A., Ophorst O.J., Van Meijer M., Germeraad W.T., Grimbergen J., Grimbergen J., van Den Doel M.A., Vogels R., van Deutekom J., Janson A.A., de Bruijn J.D., Uytdehaag F., Quax P.H., Logtenberg T., Mehtali M., Bout A. Exploiting the natural diversity in adenovirus tropism for therapy and prevention of disease. J. Virol. 2002; 76 (9): 4612-20. DOI: https://doi.org/10.1128/jvi.76.9.4612-4620.2002

15. Trivedi P.D., Byrne B.J., Corti M. Evolving horizons: adenovirus vectors’ timeless influence on cancer, gene therapy and vaccines. Viruses. 2023; 15: 2378. DOI: https://doi.org/10.3390/v15122378

16. Бязрова М.Г., Порошина А.С., Сухова М.М., Фролов Е.А., Шилкина А.Б., Латышева Е.А., Латышева Т.В., Филатов А.В. Продукция цитокинов наивными В-лимфоцитами и В-клетками памяти при стимуляции in vitro. Иммунология. 2023; 44 (5): 575-85. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-5-575-585

17. Багаев А.В., Пичугин А.В., Лебедева Е.С., Лысенко А.А., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., Народицкий Б.С., Атауллаханов Р.И., Хаитов Р.М., Гинцбург А.Л. Влияние TLR-агонистов на экспрессию в антиген-презентирующих клетках целевого белка-антигена, закодированного в аденовирусном векторе. Иммунология. 2015; 36 (4): 188-95. eLIBRARY ID: 24324492

18. Рогожин В.Н., Логунов Д.Ю., Щебляков Д.В., Шмаров М.М., Ходунова Е.Е., Гальцева И.В., Белоусова Р.В., Народицкий Б.С., Гинцбург А. Л. Эффективный способ доставки гена интерлейкина-2 в гемопоэтические клетки человека с использованием рекомбинантного аденовируса с модифицированным фибером. Acta Naturae. 2011; 3 (3): 103-10. eLIBRARY ID: 17704753.

19. Nilsson M., Ljungberg J., Richter J., Kiefer T., Magnusson M., Lieber A., Widegren B., Karlsson S., Fan X. Development of an adenoviral vector system with adenovirus serotype 35 tropism; efficient transient gene transfer into primary malignant hematopoietic cells. J. Gene Med. 2004; 6 (6): 631-41. DOI: https://doi.org/10.1002/jgm.543

20. Liang Z., Liu B., Zhao X, Liu C., Kong X. A method to mathematically determine transduction efficiency of lentivirus in HeLa cells. Gene Ther. Mol. Biol. 2013; 15: 138-46.

21. Arai T., Takada M., Ui M., Iba H. Dose-dependent transduction of vesicular stomatitis virus G protein-pseudotyped retrovirus vector into human solid tumor cell lines and murine fibroblasts. Virology. 1999; 260: 109-15. DOI: https://doi.org/10.1006/viro.1999.9773

22. Rebel V.I., Hartnett S., Denham J., Chan M., Finberg R., Sieff C.A. Maturation and lineage-specific expression of the coxsackie and adenovirus receptor in hematopoietic cells. Stem. Cells. 2000; 18: 176-82. DOI: https://doi.org/10.1634/stemcells.18-3-176

23. Rice-Boucher P.J., Mendonça S.A., Alvarez A.B., Sturtz A.J., Lorincz R., Dmitriev I.P., Kashentseva E.A., Lu Z.H., Romano R., Selby M., Pingale K., Curiel D.T. Adenoviral vectors infect B lymphocytes in vivo. Mol. Ther. 2023; 31: 2600-11. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2023.07.004

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License («Атрибуция - Всемирная»)