Динамика восстановления Т-лимфоцитов после индукции лимфопении циклофосфаном
Резюме
Введение. Химиотерапевтические препараты, применяемые в медицине главным образом для лечения онкологических заболеваний, относятся к группе факторов, вызывающих повреждение иммунной системы. Исследование механизмов восстановления Т-клеточного звена иммунной системы после воздействия цитостатических препаратов имеет важное значение как для понимания патогенеза их повреждающего действия, так и для поиска адекватных способов коррекции возникающих нарушений.
Цель работы - изучить вклад тимуса и периферического отдела иммунной системы в восстановление популяции Т-клеток после воздействия циклофосфана на мышах линии C57BL/6.
Материал и методы. Экспериментальным животным вводили циклофосфан внутрибрюшинно однократно в дозе 125 мг/кг. Мышей забивали на 0, 10, 20, 30, 60-е сутки после введения циклофосфана. В тимусе и селезенке определяли общее количество клеток и субпопуляционный состав методом проточной цитофлуориметрии.
Результаты. Обнаружено, что активно делящиеся клетки тимуса более уязвимы к действию препарата, чем лимфоциты селезенки. В то же время восстановительные процессы в тимусе начинаются раньше (на 20-е сутки) с последующим медленным восстановлением лимфоцитов селезенки (к 60-м суткам). Однако полной регенерации субпопуляции цитотоксических Т-клеток (ЦТЛ) в селезенке не отмечается даже к 60-м суткам. Исследование возрастного фенотипа Т-клеточных субпопуляций показало, что в результате действия циклофосфана происходит усиление конверсии фенотипа наивных Т-клеток в центральные Т-клетки памяти.
Заключение. Циклофосфан оказывает выраженное цитотоксическое действие на Т-клеточное звено иммунной системы мышей линии C57BL/6 с преимущественным поражением быстро делящихся популяций тимоцитов. Тимопоэз не способен компенсировать дефицит периферических Т-клеточных популяций, что ведет к усилению гомеостатической пролиферации Т-клеток, конверсии фенотипа наивных Т-клеток и накоплению Т-хелперов и ЦТЛ с фенотипом центральных Т-клеток памяти. Следствием данных изменений может стать сужение репертуара Т-клеточных рецепторов с нарушением полноценного иммунного надзора и возможным ростом онкологических, аутоиммунных и инфекционных заболеваний в последующем.
Влияние коллагеновых матрикинов на функциональное состояние лейкоцитов человека
Резюме
Введение. Матрикины - биологически активные соединения, образующиеся при частичном протеолизе белков и гликозаминогликанов внеклеточного матрикса, действуют как эндогенные регуляторы многих физиологических и патологических процессов организма. Полученные из коллагеновых белков матрикины (КМ) усиливают пролиферацию клеток соединительной ткани, стимулируют их адгезию, миграцию и синтез различных компонентов экстраклеточного матрикса, цитокинов и ростовых факторов. КМ регулируют тонус и проницаемость сосудов, участвуют в белок-белковых взаимодействиях, изменяющих функции других молекул, способствуют регенерации нервной ткани. Однако воздействие КМ в отношении клеток иммунной системы изучено далеко не полностью.
Цель исследования - комплексная оценка действия низкомолекулярных КМ на функциональную активность лейкоцитов периферической крови человека.
Материал и методы. Фракцию низкомолекулярных КМ (мол. масса <10 кДА) получали гидролизом коллагенового матрикса бактериальной коллагеназой. В зависимости от метода исследования изучение действия КМ проводили либо в цельной гепаринизированной венозной крови, либо во фракции нейтрофилов, выделенных из крови здоровых доноров. Оценивали влияние КМ на поглотительную и переваривающую функции лейкоцитов, а также на продукцию ими активных форм кислорода.
Результаты. Получены данные, что КМ способны изменять эффекторные функции фагоцитов: хотя пептиды и не повышают поглотительную способность клеток, они стимулируют их бактерицидную и синтетическую активность. Эффективность КМ зависит от их концентрации: максимальный эффект наблюдался при низких и средних концентрациях КМ (10-100 мкг/мл) и нивелировался при максимальной концентрации КМ (1000 мкг/мл).
Заключение. Таким образом, КМ проявляют иммунорегуляторную активность в отношении клеток врожденного иммунитета.
Сопоставление трех видов клеточных тест-систем для оценки биологической активности агонистов рецептора NOD2
Резюме
Введение. Агонисты рецептора NOD2 представляют собой перспективный класс активаторов врожденного иммунитета. Актуально создание тест-систем для качественного и количественного определения их биологической активности.
Цель работы - сопоставить основные характеристики трех видов репортерных клеток, предназначенных для оценки биологической активности агонистов NOD2: с эндогенной экспрессией NOD2, с временной гиперэкспрессией NOD2 и со стабильной гиперэкспрессией NOD2.
Материал и методы. Репортерные клетки с эндогенной экспрессией NOD2 (293Luc) были получены путем стабильной трансфекции клеток HEK-293T геном люциферазы под контролем NF- κB-зависимого промотора. Клетки с временной гиперэкспрессией NOD2 (293Luc-tNOD2) получали путем временной трансфекции клеток 293Luc плазмидой, кодирующей ген NOD2 под конститутивным промотором. При длительном культивировании NOD2-трансфицированных клеток с селективным антибиотиком были получены клетки, стабильно гиперэкспрессирующие NOD2 (293Luc-stNOD2). Для каждого вида клеток были получены контрольные клетки, позволяющие подтверждать активацию NF- κB через рецептор NOD2. Эти клетки стимулировали 24 ч агонистом NOD2 - мурамилдипептидом (МДП); на выходе измеряли люциферин-зависимую хемилюминесценцию клеточных лизатов.
Результаты. Фоновый сигнал у клеток 293Luc-tNOD2 и 293Luc-stNOD2 был повышен соответственно в 30 и в 170 раз по сравнению с клетками 293Luc, что указывает на активацию NF- κB в отсутствие агониста. В то же время предел количественного определения МДП в среде у клеток 293Luc-stNOD2 был на порядок меньше, чем у 293Luc (1,6 и 20 нМ соответственно). У систем с использованием клеток 293Luc и 293Luc-stNOD2 отмечались приемлемые значения правильности и повторяемости, тогда как клетки 293Luc-tNOD2 характеризовались неудовлетворительной повторяемостью, а также требовали повышенного расхода реактивов и рабочего времени.
Заключение. Клеточные линии 293Luc и 293Luc-stNOD2 могут использоваться для определения биологической активности агонистов рецептора NOD2.
Иммуногенные и защитные свойства рекомбинантного аденовируса человека 5-го серотипа, экспрессирующего ген гликопротеина G вируса бешенства вакцинного штамма РВ-97
Резюме
Введение. Бешенство - это острое инфекционное заболевание, общее для человека и животных. Для профилактики заболевания до контакта с возбудителем применяется предэкспозиционная профилактическая вакцинация (ПрЭП) групп риска. В России для этой цели применяются классические инактивированные культуральные вакцины. Данные вакцины обладают высокой эффективностью, однако могут вызывать сильные побочные реакции и требует многократного введения. Поэтому актуальной является разработка новых безопасных антирабических вакцин, позволяющих добиться протективного эффекта при однократной вакцинации.
Цель исследования - создание репликативно-дефектного вирусного вектора на основе рекомбинантного аденовируса человека 5-го серотипа, несущего ген гликопротеина G вируса бешенства, и изучение его протективных и иммуногенных свойств при иммунизации лабораторных мышей.
Материал и методы. Рекомбинантный аденовирус был получен с помощью набора AdEazy Adenoviral vector system (Stratagen, США). Для оценки защитных свойств и иммуногенности аденовируса Ad5-RV97 мыши линии BALB/c были иммунизированы однократно внутримышечно. Гуморальный иммунный ответ изучали с помощью реакции флуоресцентной вирус-нейтрализации, Т-клеточный ответ - с помощью метода ELISpot.
Результаты. Рекомбинантный аденовирус Ad5-RV97 показал 100 % защиту лабораторных мышей от заражения вирусом бешенства. Уже на 14-й день после иммунизации у животных зафиксированы высокие уровни вирус-нейтрализующих антител, продолжающие расти вплоть до 42-го дня после иммунизации. Был обнаружен значимый уровень спленоцитов (как CD4+-, так и СD8+-клеток), продуцирующих ИФН-γ в ответ на стимуляцию антигеном.
Заключение. Полученные данные позволяют расценивать аденовирус Ad5-RV97 в качестве основы для создания кандидатной антирабической вакцины, которая может применяться для ПрЭП различных групп риска.
Популяция СD8+-лимфоцитов периферической крови и ее значение для непосредственных и отдаленных результатов лечения больных трижды негативным раком молочной железы
Резюме
Введение. Трижды негативный рак молочной железы (ТН РМЖ) характеризуется агрессивным течением и высокой вероятностью рецидивирования. Важную роль в регуляции роста злокачественных новообразований, а также в эффективности различных видов противоопухолевой терапии играет иммунная система. Определение взаимосвязи СD8+-популяций лимфоцитов периферической крови (ПК) с эффективностью лечения больных ТН РМЖ может помочь в установлении иммунологических предиктивных и прогностических факторов и в повышении эффективности лечения пациенток.
Цель настоящего исследования - определение значимости исходного количества клеток СD8+-популяций лимфоцитов периферической крови (CD8+, CD3+CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28-, CD3-CD8+)для непосредственных (степень лечебного патоморфоза опухоли) и отдаленных (прогрессирование заболевания и выживаемость) результатов лечения больных трижды негативным раком молочной железы.
Материал и методы. У больных со II-III стадиями (n = 72; медиана возраста 50 лет) до начала неоадъювантной химиотерапии (цисплатин + паклитаксел) определяли процентное содержание CD8+, CD3+CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28−, CD3−CD8+-лимфоцитов ПК с помощью многопараметрового цитометрического анализа. Исследовалась взаимосвязь исходного количества клеток данных популяций со степенью лечебного патоморфоза опухоли (ЛПО), прогрессированием заболевания и выживаемостью пациенток. Период наблюдения составил 60 мес.
Результаты. Процентное содержание CD8+CD28+-лимфоцитов и величина соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28− до лечения были статистически значимо выше у больных с высокой степенью (IV) ЛПО, у пациенток без прогрессирования заболевания (ПЗ) и у выживших больных, по сравнению с пациентками с ЛПО I-III степени, больными с ПЗ и умершими пациентками. Повышение исходного количества CD8+CD28+-лимфоцитов ПК и величины соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- ассоциировалось с увеличением безрецидивной и общей выживаемости пациенток по сравнению с больными, у которых эти показатели были снижены. У пациенток, умерших в течение периода наблюдения, до начала химиотерапии было повышено количество CD3-CD8+-лимфоцитов. Повышение числа этих клеток сочеталось также с уменьшением ОВ больных.
Заключение. Популяция CD8+CD28+-лимфоцитов периферической крови и величина соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- могут быть возможными предиктивными факторами у пациенток со II-III стадиями ТН РМЖ, получавших неоадъювантную химиотерапию цисплатином и паклитакселом.
Роль сывороточного амилоида А и С-реактивного белка в прогнозировании послеоперационных осложнений и обострения туберкулезного процесса после хирургического вмешательства у детей старшего возраста и подростков
Резюме
Введение. Поиск ранних лабораторных маркеров, указывающих на развитие обострения или осложнения основного процесса у детей и подростков, оперированных по поводу туберкулеза, является актуальной проблемой.
Цель исследования - изучить изменения уровня белков острой фазы воспаления - сывороточного амилоида А (САА) и С-реактивного белка (СРБ) - до операции, через 1 нед и 1-6 мес после ее проведения для раннего прогнозирования послеоперационных осложнений и обострения туберкулеза.
Материал и методы. Исследованы 28 пациентов, которым на разных сроках химиотерапии (ХТ) проведены оперативные вмешательства различного объема. Сформированы 2 группы: 1-я - 22 пациента (без осложнений и прогрессирования туберкулеза), 2-я - 6 пациентов (послеоперационные осложнения - 4, прогрессирование туберкулеза - 2). Уровни САА и СРБ изучали методом иммуноферментного анализа.
Результаты. В 1-й группе уровень САА до оперативного вмешательства составлял 13,11 ± 0,63 мкг/мл, во 2-й группе - 14,86 ± 0,72 мкг/мл, эти значения достоверно не различались. Через 1 нед после операции в 1-й группе уровень САА был достоверно ниже, чем во 2-й группе (12,3 ± 0,57 мкг/мл и 15,2 ± 0,6 мкг/мл; р = 0,001747). Подобные различия сохранялись и через 1 мес (13,57 ± 0,46 мкг/мл и 18,5 ± 0,21 мкг/мл, р = 0,0096; соответственно). Уровень СРБ в исследованных группах имел сходную динамику. Через 1 нед и через 1 мес после операции во 2-й группе отмечен достоверный подъем уровня СРБ: 18,8 ± 0,76 мг/л и 14,75 ± 1,4 мг/л (р = 0,017581), и 18,6 ± 1,1 мг/мл и 12,8 ± 1,73 мг/мл (р = 0,009067) соответственно.
Заключение. Одновременное повышение уровней СРБ и САА на ранних сроках после операции служит прогностическим критерием послеоперационного осложнения (экссудативный плеврит) или обострения туберкулеза.
Клиническая оценка В- и Т-лимфоцитов у пациентов с хирургическим сепсисом
Резюме
Введение. Иммунные нарушения при сепсисе включают в себя широкий спектр реакций от "цитокинового шторма" до глубокой иммуносупрессии. Клеточные реакции врожденного и адаптивного иммунитета ответственны за меняющийся сценарий на разных этапах заболевания. Исследований, касающихся аспектов механизмов иммунного ответа со стороны клеток адаптивного иммунного ответа при сепсисе, мало. Отмечены важные изменения количественного состава и роль В- и Т-лимфоцитов в регуляции воспаления на различных этапах течения сепсиса. Вопрос о возможности их использования в качестве биомаркеров при септических состояниях и критериев при диагностике его фенотипов и эндотипов остается открытым.
Цель исследования - провести расширенное исследование клеточного звена адаптивного иммунитета при различных клинических вариантах течения сепсиса в динамике.
Материал и методы. Представлены данные проспективного исследования, в котором были проанализированы результаты состояния клеток адаптивного иммунитета 43 пациентов. С учетом тяжести состояния и выраженности органной недостаточности они были распределены на группы по шкале - SOFA (Sepsis-related Organ Failure Assessments Score Sequential Organ Failure Assessment). Забор крови проводился у пациентов в первые 48 ч после поступления в отделение интенсивной терапии и на 21-28-е сутки заболевания. Определение уровня В- и Т-лимфоцитов (CD3+CD19+, CD3+CD19-, CD3+CD4+, CD3+CD8+), а также субпопуляций Т-лимфоцитов Th1 (CD3+CD4+ИФНγ+), Th2 (CD3+CD4+H3-4+), Treg (CD3+CD4+CD25brightCD127negCD45+) осуществляли методом проточной цитометрии.
Результаты. Отмечена лимфопения на 21-28-е сутки заболевания в группе с более тяжелым течением сепсиса (р < 0,05), как относительно группы сравнения, так и по отношению к показателям дебюта болезни. Уровень CD19+-лимфоцитов был снижен в группе с более выраженной тяжестью органной дисфункции относительно группы сравнения (р < 0,05) на 21-28-е сутки. В группах с различной степенью органной дисфункции на начальной стадии заболевания (первые 48 ч) не выявлено дисбаланса соотношения Th1 и Th2. На более поздних стадиях (21-28-е сутки) преобладает Th2-субпопуляция Т-лимфоцитов (р < 0,05), а в группе с выраженной органной дисфункцией зарегистрировано повышенное содержание Treg (р < 0,01).
Заключение. Выявлены минимальные изменения со стороны клеток адаптивного иммунитета на начальных стадиях сепсиса, независимо от тяжести течения и степени органной дисфункции. На более поздних сроках (21-28-е сутки) зафиксировано снижение CD19+-лимфоцитов, преобладание Th2-субпопуляции над Th1 (р < 0,05), повышенное содержание Treg. Одним из маркеров, позволяющих определять наступление иммуносупрессивной фазы сепсиса, может явиться количество Treg.
Взаимообусловленность влияний I и II типов воспаления на процессы липопероксидации и антиоксидантной защиты у пациентов с механической желтухой желчнокаменного генеза в послеоперационном периоде
Резюме
Введение. Патогенез механической желтухи (МЖ) сложен, характеризуется развитием местной и системной воспалительных реакций, эндотоксикоза и сопутствующих органных и гистодеструктивных изменений. Воспалительная активация иммунных клеток стимулирует транскрипцию генов, ответственных за окислительный стресс; активные формы кислорода разрушают мембраны иммунокомпетентных клеток, пролонгируя локальное воспаление.
Цель исследования - оценка вклада иммуновоспалительных изменений в процессы липопероксидации и функционирование антиоксидантной защиты в формировании послеоперационных осложнений у больных МЖ желчнокаменного генеза.
Материал и методы. Обследованы 70 больных с клинической картиной МЖ. Изучена концентрация 6 цитокинов: I (ИЛ-2, ИЛ-8, ФНОα, ИФН-γ) и II (ИЛ-4, ИЛ-10) типов воспаления методом иммуноферментного анализа. Содержание малонового диальдегида и активность антиоксидантных ферментов изучали в эритроцитах спектрофотометрическими методами. Статистические данные анализировали с помощью прикладных программ Statistica 10.
Результаты. Продемонстрирована преимущественная роль в патогенезе МЖ с осложненным послеоперационным периодом воспалительного процесса I типа, а в патогенезе МЖ с неосложненным послеоперационным периодом - воспаления I и II типов. Обнаружено значительное повышение содержания малонового диальдегида в эритроцитах у больных обеих сравниваемых групп, что подтверждает усиление процессов липопероксидации в раннем послеоперационном периоде. Вместе с тем выявленные в нашей работе результаты, указывающие на усиление активности антиоксидантной защиты, увеличение активности ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, которые способствуют снижению проявлений окислительного стресса и свидетельствуют скорее о протекторной роли воспаления II типа у больных МЖ с неосложненным послеоперационным периодом.
Заключение. У больных МЖ с осложненным послеоперационным периодом выявляется усиление процессов липопероксидации, снижение активности ферментов антиоксидантной защиты и преимущественный I тип воспаления. У больных МЖ с неосложненным послеоперационным периодом проявления окислительного стресса компенсируются повышением активности энзимов антиоксидантной защиты, выявляются I и II типы воспаления.
Сравнительный анализ современных методов диагностики аллергических реакций немедленного типа
Резюме
Эффективность лечения аллергических заболеваний (АЗ), большинство которых возникает из-за развития у пациентов аллергических реакций немедленного типа (АРНТ), напрямую связана с диагностикой. Для специфической диагностики АЗ, обусловленных развитием АРНТ, применяют тесты как in vivo, так и in vitro, которые связаны с образованием комплекса аллерген - антитело класса IgE. Один из диагностических методов in vivo - кожные пробы - прост в постановке, результат исследования известен через 20 мин. Однако для постановки кожных проб имеется ряд противопоказаний, несоблюдение которых может спровоцировать нежелательные осложнения, в том числе и анафилактический шок. Современные тесты in vitro (REAST и аллергочип) противопоказаний для проведения не имеют и позволяют более точно установить причинно-значимый аллерген. Они относятся к методам молекулярной диагностики (МД), поскольку при их применении используют отдельные компоненты природного аллергенного комплекса, включающего несколько различных антигенных детерминант, которые разделяются на мажорные и минорные. Главные (мажорные) компоненты аллергенного комплекса вызывают сенсибилизацию у 50 % и более пациентов, минорные компоненты аллергенного комплекса - менее чем у 10 % пациентов. С помощью методов МД был изучен механизм возникновения перекрестных аллергических реакций на аллергены, к которым у пациента не было первичной сенсибилизации, и разработаны карты перекрестной иммунореактивности. Методы МД более затратны по сравнению с кожными пробами, однако по их результатам можно оценить эффективность аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ), что приводит к существенному снижению стоимости лечения. Если у пациентов выявлена сенсибилизация к главным компонентам аллергенного комплекса, то АСИТ будет эффективна, поскольку препараты аллергенов, используемые для ее проведения, представляют собой водно-солевые экстракты только природных аллергенов, в которых присутствуют в значительных количествах главные аллергенные компоненты.
Заболевания пародонта и атеросклероз: микроэкологические, метаболические и иммунологические механизмы взаимосвязи
Резюме
Обзор содержит анализ литературных данных последних десятилетий, посвященный микроэкологическим, метаболическим и иммунологическим механизмам связи между заболеваниями пародонта и атеросклеротическим поражением сосудов. Показана роль липидного обмена и иммунных механизмов, подтвержденная современными представлениями о патогенезе атеросклероза. Обсуждена концепция о потенциальном значении инфекционных агентов как компонентов биопленки зубодесневой борозды в патогенезе атеросклероза с позиций данных последних лет о свойствах бактерий-персистеров. Представлены доказательства участия пародонтопатогенных бактерий в формировании атеросклеротических бляшек и рассмотрены механизмы такого участия. В итоге удалось показать, что одним из главных связующих компонентов для заболеваний пародонта и атеросклероза служит этиологический фактор, включающий способность пародонтопатогенных бактерий влиять на липидный обмен в тканях, проникать внутрь макрофагов, персистировать в кровотоке, участвовать в формировании пенистых клеток и атеросклеротических бляшек, влиять на прогрессирование атеросклеротического и аутоиммунного процесса.
Вирус Эпштейна-Барр: разработка вакцин
Резюме
Введение. Вакцинация - один из наиболее эффективных способов снижения заболеваемости. Инфекция, вызванная вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ), при отсутствии вакцинации представляет серьезную проблему здравоохранения.
Целью систематического обзора стало изучение разработки средств специфической иммунопрофилактики ВЭБ-инфекции.
Материал и методы. Поиск осуществлялся в базах eLibrary, Cyberleninka, The Cochrane Library, PubMed, clinicaltrials.gov и на сайте Researchgate в соответствии с разработанной стратегией с учетом критериев включения и невключения. Глубина поиска составила 20 лет. Период поиска 04.05.2020-19.05.2020. Окончательный список публикаций включал 10 исследований.
Результаты. Из 10 отобранных работ семь отображали результаты испытаний канди-датных вакцин, нацеленных на предотвращение инфицирования ВЭБ, три - описывали кандидатные вакцины для иммунизации инфицированных ВЭБ индивидуумов для экстренной профилактики развития инфекции или лечения ВЭБ-ассоциированных опухолей. Клинические испытания (I фаза) были проведены для двух кандидатных вакцин, одна из которых в последующем прошла II фазу. Однако полученные результаты не позволили продолжить испытания данной кандидатной вакцины.
Заключение. Ни одна из кандидатных вакцин на настоящий момент не прошла все фазы клинических испытаний.