Введение. В литературе довольно подробно описана роль отдельных цитокинов в индукции дифференцировки различных субпопуляций В-клеток в плазмабласты и плазматические клетки. В то же время остается малоизученным вопрос о том, какие цитокины продуцируют сами В-лимфоциты и их субпопуляции.
Цель исследования - определить цитокиновый профиль В-лимфоцитов человека при стимуляции in vitro. В задачи исследования также входило сравнительное изучение спектра цитокинов, секретируемых наивными В-лимфоцитами, а также В-клетками памяти с переключенным и непереключенным синтезом Ig.
Материал и методы. Субпопуляции наивных В-лимфоцитов, а также В-клеток памяти с переключенным (IgG+CD27+) и непереключенным (IgM+CD27+) синтезом Ig выделяли с помощью проточного сортировщика клеток. Выделенные В-лимфоциты стимулировали in vitro в присутствии экзогенного ИЛ-21 и фидерных клеток, несущих молекулу CD40L. Супернатанты, собранные от стимулированных В-клеток, анализировали на наличие цитокинов. Исследование носило скрининговый характер. Чтобы охватить максимально широкую панель цитокинов, в работе использовался высокопроизводительный метод мультиплексного анализа. В тестируемую панель входили следующие цитокины: ЭФР, эотаксин, Г-КСФ, ГМ-КСФ, ИФН-α2, ИФН-γ, ИЛ-10, ИЛ-12P40, ИЛ-12P70, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17A, ИЛ-1RA, ИЛ-1α, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, ФНОα, ФНОβ, VEGF, ФРФ-2, ТФРα, Flt-3L, фракталкин, GRO, MCP-3, MDC, PDGF-AA, PDGF-AB/BB и ИЛ-9.
Результаты. Были получены и функционально охарактеризованы 3 субпопуляции стимулированных В-лимфоцитов: наивные В-лимфоциты, В-клетки памяти с переключенным (IgG+CD27+) и непереключенным (IgM+CD27+) синтезом Ig. Стимулированные В-лимфоциты характеризовались активной пролиферацией, приобретали фенотип плазмабластов и секретировали Ig. В-лимфоциты, стимулированные in vitro в системе ИЛ-21/CD40L, продуцировали широкий спектр цитокинов. В наибольшей степени секретировались IP-10, MDC и MCP-1. Секреция ИЛ-17A, ИЛ-12P70, ТФРα, ИФН-γ, ИЛ-3, ИЛ-5 и ИЛ-1β была ниже уровня детекции. Наивные В-клетки секретировали цитокины ИЛ-10, MCP-3, MDC, ИЛ-1α, MCP-1, ФНОα и ФНОβ более активно, чем В-клетки памяти. Для цитокинов ИЛ-10, MDC, MCP-1, ФНОα и ФНОβ значимая разница прослеживалась в отношении обеих субпопуляций В-клеток памяти. Для MCP-3 значимая разница наблюдалась только в отношении В-клеток памяти с переключенным синтезом Ig, а для ИЛ-1α - только по сравнению с В-клетками памяти с непереключенным синтезом Ig.
Заключение. Определены цитокиновые профили активированных В-лимфоцитов и их субпопуляций. Полученные результаты показывают, что продукция цитокинов В-клетками в значительной степени зависит от активации и дифференцировки В-лимфоцитов.