Иммунология

Введение. Несмотря на бурное развитие высокопроизводительного секвенирования, для генов Ig до сих пор основным методом остается секвенирование из единичных В-лимфоцитов по Сэнгеру. С помощью этого метода был получен целый ряд моноклональных антител (МкАт) для лечения и профилактики COVID-19.

В качестве источника генов Ig обычно выступают В-клетки памяти или плазматические клетки. Еще одним привлекательным объектом для секвенирования генов Ig и последующего создания антиген-специфических МкАт являются циркулирующие плазмабласты, которые совмещают в себе такие свойства, как высокий уровень экспрессии мРНК и экспрессия поверхностного В-клеточного рецептора.

Цель исследования - оптимизация метода секвенирования генов Ig из единичных циркулирующих плазмабластов. Исследование выполнено на примере плазмабластов, формирующихся при острой SARS-CoV-2 инфекции.

Материал и методы. Забор крови у пациента с тяжелой формой COVID-19 проводили на 10-й день от появления первых симптомов. Плазмабласты выделяли из мононуклеарной фракции клеток крови с помощью проточного сортировщика клеток по фенотипу CD19⁺CD27⁺⁺CD38⁺⁺CD3^-CD16^-CD14^-. Секрецию IgG определяли методом иммуноферментного анализа, а антитело-секретирующие клетки - методом ELISpot. Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) клетки распределяли по одной на пробирку. После лизиса клеток синтез кДНК проводили с помощью набора Invitrogen SuperScript III (США). Далее образец делили пополам и раздельно проводили полугнездовую ПЦР для амплификации вариабельных генов тяжелой (VH) и легкой (VL) цепи. Полученные ПЦР-продукты секвенировали по Сэнгеру. Нуклеотидные последовательности анализировали с использованием онлайн-инструмента Igblast с системой определения доменов IMGT, a также программы UGENE (версия 50.0). ПЦР-продукты, полученные из одного образца, клонировали в экспрессионные векторы AbVec-hIgG1-799 и AbVec-hIgKappa-798 для последующей наработки IgG. Клетки HEK293 котрансфецировали плазмидами, кодирующими легкую и тяжелую цепь Ig.

Результаты. В предварительных экспериментах было обнаружено, что при выделении В-клеток с помощью стандартного набора для иммуномагнитной сепарации происходит потеря популяции плазмабластов. В последующем плазмабласты выделяли методом сортировки с помощью проточного цитометра. Доля плазмабластов от всех В-лимфоцитов для обследованного пациента составила 15 %. Антитело-секретирующие клетки в популяции плазмабластов составляли 38 %. Были получены 15 парных последовательностей VL- и VH-генов. Было выявлено 14 уникальных нуклеотидных последовательностей VL-генов и 10 уникальных нуклеотидных последовательностей VH-генов. Полученные последовательности отличались от зародышевой конфигурации VH и VL в пределах от 0 и до 25 % (медиана 9 %) и от 0 до 11 % (медиана 7 %) соответственно. CDR3-участки VH генов заметно отличались друг от друга, в то время как CDR3-участки VL генов были схожи между собой. На основании определенных нуклеотидных последовательностей были получены два моноклона IgG, которые секретировались в супернатант клеток HEK293, котрансфецированных экспрессионными векторами, несущими гены тяжелых и легких цепей IgG.

Заключение. Метод секвенирования генов Ig из единичных циркулирующих плазмабластов представляет собой перспективный подход для создания человеческих МкАт. Данный метод в сочетании с предварительной стимуляцией В-лимфоцитов in vitro, сортировкой антиген-специфичных клеток, а также использование иммунодефицитных мышей открывает новые возможности для разработки таргетных препаратов. Эти походы позволяют значительно ускорить процесс разработки новых терапевтических антител, что особенно важно в борьбе с новыми инфекционными заболеваниями.

Введение. Адоптивная клеточная терапия направлена на введение иммунных эффекторов с активированной естественной или искусственно созданной противоопухолевой активностью для подавления роста опухоли. Основными направлениями для адоптивного переноса клеток является использование генетически модифицированных T-клеток (TCR- и CAR-T-клетки). Изучение метаболизма иммунных клеток в моделях опухолевого роста in vitro позволяет определить сохранность и эффективность Т-клеток в условиях опухолевого микроокружения.

Цель исследования - анализ метаболической активности различных типов генно-инженерных T-клеток в совместной культуре с опухолевыми клетками в форме 3D-сфероидов.

Материал и методы. Генетически-модифицированные T-клетки получали из клеток периферической крови здоровых доноров после трансдукции гамма-ретровирусными векторами, кодирующими рецепторы для распознавания опухолевых антигенов. Оценку интенсивности процессов гликолиза и окислительного фосфорилирования в NY-ESO-1 TCR-T, MAGE-A4 TCR-подобных CAR-T-клетках и GD2-специфичных CAR-T-клетках после культивирования с 3D-сфероидами оценивали с помощью анализатора Seahorse XFp. Метаболическую активность трансдуцированных клеток при сокультивировании с 3D-сфероидами опухолевой линии SK-Mel-37 оценивали по митохондриальному потенциалу и продукции активных форм кислорода с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием IN Cell Analyzer 6000 с модулем жизнеобеспечения клеточных культур. Формирование структуры 3D-сфероидов опухолевой линии SK-Mel-37 оценивали с помощью флуоресцентной микроскопии.

Результаты. Оценка параметров гликолиза и окислительного фосфорилирования показала, что базальный уровень OCR у NY-ESO-1 TCR и GD2-CAR-Т-клеток при контакте с опухолями увеличивается в несколько раз, при этом MAGE-A4 TCR-подобные CAR-Т-клетки показали слабую метаболическую активность при контакте c опухолевым сфероидом по сравнению с контрольными клетками. При суточном прижизненном наблюдении совместной культуры NY-ESO-1 TCR-T, MAGE-A4 TCR-подобных CAR-T- и GD2-специфичных CAR-T-клеток со сфероидами показано, что при наличии активных форм кислорода они проявляют достаточно высокую митохондриальную активность и способны подавлять опухолевые клетки.

Заключение. Полученные MAGE-A4 TCR-подобные CAR-Т-клетки, GD2-специфичные CAR-T-клетки и NY-ESO-1 TCR-T-клетки при сокультивировании со сфероидами опухолевой линии меланомы SK-Mel-37 используют преимущественно окислительное фосфорилирование и при этом разрушают 3D-структуры опухолевых клеток.

Введение. Нейтрофильные внеклеточные ловушки (NETs) играют важную роль в иммунном ответе организма, способствуя нейтрализации патогенов. Однако избыточное образование NETs может приводить к развитию воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Интерлейкин-37 (ИЛ-37) - противовоспалительный цитокин, способный ингибировать воспалительные реакции, в том числе - опосредованные нейтрофилами. Однако сведения о влиянии ИЛ-37 на процесс НЕТоза противоречивы.

Цель настоящего исследования - изучить влияние ИЛ-37 на процесс НЕТоза в нейтрофилах человека in vitro.

Материал и методы. Нейтрофилы, выделенные из крови здоровых доноров, стимулировали форбол-12-миристат-13-ацетатом (ФМА) для индукции НЕТоза. Коммерческий ИЛ-37 добавляли в культуральную среду в различных концентрациях (0,5; 2,5; 10 и 100 нг/мл) и оценивали его влияние на процесс НЕТоза. Визуализацию NETs проводили с использованием флуоресцентного окрашивания и имиджинговой системы Celena X.

Результаты. В нейтрофилах, активированных ФМА, но не обработанных ИЛ-37, процент НЕТоза составлял 92 %. Предварительная инкубация нейтрофилов с ИЛ-37 в различных концентрациях не приводила к снижению доли нейтрофилов, образующих NETs, по сравнению с клетками, стимулированными только ФМА.

Заключение. Полученные результаты не подтверждают предположение о том, что ИЛ-37 способен подавлять НЕТоз путем прямого воздействия на нейтрофилы.

Введение. Десквамация эпителия дыхательных путей у пациентов с бронхиальной астмой (БА) - один из структурных признаков эпителиальной дисфункции, обусловленной триггерным действием повреждающих факторов окружающей среды и индуцированной провоспалительным влиянием цитокинов.

Цель - определить взаимосвязь между функцией легких, воспалительным ответом бронхов и содержанием ИЛ-4, ИЛ-17A и ИФН-γ в крови при БА у пациентов с холодовой гиперреактивностью дыхательных путей (ХГДП) и в сочетании с повышенной реакцией бронхов на гипоосмолярный стимул.

Материал и методы. Обследованы 66 пациентов c БА, распределенных в 3 группы на основе реакции дыхательных путей (падение объема форсированного выдоха за 1 с DОФВ₁) в ходе проведения бронхопровокационных тестов с изокапнической гипервентиляцией холодным воздухом (ИГХВ) и ультразвуковой ингаляцией аэрозоля дистиллированной воды (ИДВ): 1-я группа - с верифицированной сочетанной гиперреактивностью бронхов на холодовой и гипоосмотический стимул; 2-я группа - с гиперреактивностью только на холодовой стимул; 3-я группа - с отсутствием гиперреактивности на оба стимула. Функцию внешнего дыхания и реакцию дыхательных путей оценивали методами спирометрии и бодиплетизмографии. Концентрацию ИЛ-4, ИЛ-17A и ИФН-γ в сыворотке периферической крови определяли методом мультиплексного анализа. Проводили цитологическое исследование индуцированной мокроты.

Результаты. У пациентов 1-й и 2-й групп зарегистрированы более низкие значения параметров бронхиальной проходимости, более высокое содержание десквамированного бронхиального эпителия (БЭ) и нейтрофилов в мокроте, уровней ИЛ-4, ИФН-γ и ИЛ-17A в крови. Количество в мокроте десквамированного эпителия коррелировало со степенью бронхоконстрикции при проведении провокационных тестов: с ∆ОФВ_1ИГХВ (r = -0,57; р = 0,004) и ∆ОФВ_1ИДВ (r = -0,61; р = 0,027). Прослеживалась зависимость между содержанием БЭ в мокроте и параметрами бронхиальной проходимости: с Raw ex (r = 0,67; р = 0,025) и ОФВ₁ (r = -0,68; р = 0,002). Содержание ИЛ-17A в крови коррелировало с ∆ОФВ_1ИГХВ (Rs = -0,32; р = 0,048), отношением остаточного объема легких к общей емкости легких (Rs = -0,66; р = 0,0015), содержанием ИЛ-4 в сыворотке крови (Rs = -0,66; р = 0,0015).

Заключение. У пациентов с БА с изолированной ХГДП и сочетанной реакцией бронхов на холодовой и гипоосмолярный стимул отмечается увеличение содержания клеток десквамированного эпителия и количества нейтрофилов в мокроте, которое ассоциируется с увеличением концентрации ИЛ-4, ИФН-γ и ИЛ-17A и сопряжено с ухудшением проходимости дыхательных путей.

Введение. Реконвалесцентная плазма (ССР) выздоровевших широко использовалась для терапии пациентов с COVID-19. Ее клиническую эффективность связывают с наличием вирус-нейтрализующих антител и иммуномодулирующими свойствами, определяемыми многими белками, в том числе цитокинами.

Цель исследования - оценить значение уровня и соотношения уровней цитокинов ССР для изменения клинико-лабораторных показателей в процессе ее применения у пациентов с COVID-19 с различным исходом заболевания.

Материал и методы. В исследование включены результаты обследования 111 пациентов с COVID-19, получавших в 2020-2022 гг. лечение с использованием плазмы иммунной анти-COVID-19 (ССР) производства Республиканского научно-практического центра трансфузиологии и медицинских биотехнологий (Минск, Беларусь). Цитокины в образцах ССР определяли с помощью иммуноферментного анализа. Лабораторные показатели периферической крови: лейкоциты, лимфоциты, нейтрофилы, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), С-реактивный белок (СРБ), D-димер и др. - измеряли за 2-3 дня до и через 5-7 дней после переливания ССР. Для анализа полученных данных использовали программы STATISTICA 10.0, MedCalc 22.009, программный пакет R 4.3.1.

Результаты. После применения ССР в группе пациентов, впоследствии умерших, развивались лимфопения и нейтрофилез при стабильно высоких значениях СОЭ, СРБ, D-димера, в отличие от группы пациентов, впоследствии выздоровевших, у которых развивался лимфоцитоз и наблюдалось снижение уровней СОЭ и СРБ. В ССР, перелитой пациентам группы умерших, выявлены более высокие уровни ИЛ-6 и ИНФ-γ, а также соотношение уровней ИЛ-6/ИЛ-10, ИЛ-6/IP-10, ИНФ-γ/ИЛ-10, ИНФ-γ/IP-10, ИНФ-γ/МСР-1 по сравнению с таковыми в ССР, перелитой пациентам группы выздоровевших. Уровень насыщения крови кислородом имел отрицательную корреляционную связь с уровнем ИФН-γ в ССР, перелитой пациентам группы умерших (r = -0,5519; n = 14; p = 0,041), но не пациентам из группы выздоровевших. Значения уровней ИЛ-6 и ИНФ-γ, соотношений уровней ИЛ-6/ИЛ-10, ИЛ-6/IP-10, ИНФ-γ/МСР-1 в ССР имели высокую чувствительность и специфичность при оценке прогноза исхода заболевания на основании ROC-анализа полученных данных. При неблагоприятном исходе заболевания выявлена прямая корреляционная связь уровня ИЛ-6 в ССР с повышением уровня СРБ в крови реципиентов, а также уровня ИНФ-γ в ССР с повышением содержания лейкоцитов и нейтрофилов в периферической крови реципиентов. При благоприятном исходе заболевания установлена обратная корреляционная связь между повышением уровней ИЛ-10, IP-10, МСР-1, соотношения уровней цитокинов ИНФ-γ/ИЛ-10 и ИНФ-γ/МСР-1 в ССР и снижением уровня СОЭ, D-димера, содержания лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов, уровня СОЭ соответственно в периферической крови реципиентов.

Заключение. Установлена связь цитокинов ИЛ-6, ИНФ-γ, МСР-1, IP-10 и соотношения уровней цитокинов с их участием в плазме иммунной анти-COVID-19 с изменением показателей содержания лейкоцитов, нейтрофилов, СОЭ, СРБ, D-димера в периферической крови пациентов с COVID-19 - реципиентов ССР. Характер этих корреляционных связей отличался для групп выздоровевших или впоследствии умерших реципиентов ССР. Полученные данные свидетельствуют об участии вышеперечисленных цитокинов в иммуномодулирующем действии ССР.

Введение. Хронический риносинусит (ХРС) является одним из наиболее распространенных патологических процессов в структуре ЛОР-патологии. Хроническое течение этого заболевания проявляется стойким воспалением слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух, часто обусловленным наличием нескольких этиопатогенетических факторов, что существенно усложняет выбор тактики лечения. В последние годы накапливается все больше данных о роли нейтрофилов и, в частности, такого механизма иммунного ответа, как образование нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ), в формировании заболеваний верхних и нижних отделов дыхательных путей.

Цель - изучение воспалительных изменений, связанных с НВЛ и процессами НЕТоза, в слизистой оболочке околоносовых пазух у пациентов с ХРС без полипов.

Материал и методы. В исследование включены 60 пациентов с диагнозом ХРС без полипов и 15 пациентов группы сравнения без риносинусита с показаниями к хирургическому лечению по поводу другой ЛОР-патологии. У всех участников исследования проводилось изучение слизистой оболочки околоносовых пазух с использованием иммуногистохимического анализа.

Результаты. В представленной работе описаны результаты иммуногистохимического анализа распространения НВЛ и интактных нейтрофилов в слизистой оболочке полости носа и околоносовых пазух у пациентов с ХРС без полипов и здоровых доноров. В результате проведенного исследования было выявлено скопление НВЛ и нейтрофилов на стадии образования НВЛ (нетотические нейтрофилы) в гистологическом материале воспаленной слизистой оболочки околоносовых пазух пациентов с ХРС без полипов и их отсутствие у здоровых доноров (p < 0,001).

Заключение. Данные, полученные в представленной работе, могут способствовать расширению и переориентации существующей терапии ХРС без полипов с целью подавления активированных нейтрофилов, в частности НВЛ.

Введение. В течение долгого времени объяснение причин повторяющегося прерывания беременности на ранних сроках гестации (привычного выкидыша, ПВ) связывали с особенностями гистосовместимости родителей по системе HLA и в основе исследований лежал анализ аллельных вариантов генов HLA. В настоящее время сложилось мнение о необходимости проведения исследований иммунологических причин ПВ, не ограничиваясь только системой HLA.

Цель - оценить возможное влияние генетических особенностей иммуноглобулиноподобных рецепторов клеток-киллеров (KIR) НК-клеток и молекул HLA класса I (HLA‑I), являющихся их лигандами (KIR‑L), на исходы беременности, наступившей на фоне лечения ПВ с использованием иммуноцитотерапии (ИЦТ).

Материал и методы. В исследование включили 67 пациенток с диагнозом ПВ. Пациентки в результате простой рандомизации были разделены на 2 группы: группа пациенток (n = 39), стандартное лечение которым дополнили ИЦТ, и группа пациенток (n = 28), которым не проводили ИЦТ. ИЦТ проводили дважды вне беременности и дважды во время беременности. Для типирования генов KIR и генов HLA‑I использовали периферическую кровь матери, пуповинную кровь новорожденного, ткань хориона абортуса. Типирование проводили методом высокопроизводительного секвенирования NGS.

Результаты. Не выявлено различий в частотах встречаемости генотипов KIR и представленности KIR‑L у матерей с различными исходами беременности при лечении ПВ без и с использованием ИЦТ. Однако при обоих способах лечения невыношенные беременности отличались от беременностей, завершившихся рождением ребенка, отсутствием у всех плодов KIR‑L с эпитопом A3. Кроме того, при лечении с применением ИЦТ плоды в случае невыношенных беременностей чаще являлись носителями KIR‑L с эпитопом Bw4‑80I на молекуле HLA‑B.

Заключение. Отсутствие у плода эпитопа HLA-A3, а также наличие эпитопа HLA-Bw4-80I может рассматриваться как предпосылка ПВ и низкой эффективности его лечения.

Введение. Несмотря на многочисленные исследования, направленные на идентификацию протеолитических фрагментов белков в качестве потенциальных онкомаркеров, до настоящего времени не удалось разработать панель продуктов протеолиза, которая обладала бы достаточной чувствительностью и специфичностью для улучшения диагностики онкологических заболеваний.

Известно, что плазмин (Pm), активная форма плазминогена (Pg), способен расщеплять иммуноглобулины, в частности IgG, с образованием фрагментов, имеющих С-концевой остаток лизина. Это приобретает особое значение в контексте структуры Pg, тяжелая цепь (Pg-H) которого содержит лизин-связывающие участки, расположенные в крингл-доменах.

Ранее нами была предложена концепция диагностического теста детекции протеолитических фрагментов IgG с использованием тяжёлой цепи Pg. Данный подход основан на способности лизин-связывающих участков Pg специфически взаимодействовать с С-концевыми остатками лизина фрагментов IgG, которые образуются в результате протеолитической активности Pm.

Цель данного исследования - анализ уровня продуктов деградации IgG в сыворотке крови пациентов с раком желудка.

Материал и методы. Pg выделяли из пула плазмы крови человека аффинной хроматографией на Lys-Sepharose 4B в присутствии апротинина. Тяжелую цепь получали активацией Pg урокиназой с последующим восстановлением S-S-связей между цепями Pm в условиях, исключающих автолиз. Затем ее отделяли от других продуктов реакции аффинной хроматографией на Lys-Sepharose 4B в присутствии апротинина. Чистоту препаратов проверяли методом SDS-электрофореза в 12 % ПААГ. Уровни продуктов деградации IgG оценивали с помощью тяжелой цепи Pg, сорбированной на 96-луночном планшете.

Статистическая обработка результатов была выполнена с использованием программного обеспечения Statistica 12 (StatSoft Inc., США). Межгрупповые различия анализировали с применением критерия Манна-Уитни. Для оценки информативности уровня IgG-фрагментов проводили ROC-анализ. Статистическую значимость различий определяли при p < 0,05.

Результаты. ROC-анализ показал, что у пациентов с раком желудка чувствительность составила 68 %, а специфичность - 85 %. Уровень IgG-фрагментов, связавшихся с Pg-H, выражали в виде коэффициента, равного отношению оптической плотности образца в иммуноферментном анализе (ИФА) к пороговому значению (коэффициент IgG-LysK). Пациенты с подтвержденным диагнозом "рак желудка" по результатам теста на IgG-LysK были разделены на 2 группы: группа с положительным результатом теста (IgG-LysK+) и группа с отрицательным результатом теста (IgG-LysK-), считающимся ложноотрицательным. Исследование показало, что уровень общего IgG в первой группе был на 22 % выше, чем во второй.

Сравнение протромбинового времени выявило его существенное снижение в группе с ложноотрицательными (IgG-LysK-) по сравнению с положительными (IgG-LysK+) коэффициентами. Активность α₂-антиплазмина в плазме крови пациентов с раком желудка с положительными коэффициентами IgG-LysK была в 2 раза ниже, чем у пациентов с ложноотрицательными значениями. Различий в активности протеина С между положительными и ложноотрицательными образцами не обнаружено.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют об активном протеолизе IgG в опухолевом микроокружении у пациентов с раком желудка. Протеолитические фрагменты IgG попадают в общую циркуляцию. При этом у пациентов с раком желудка на всех стадиях заболевания уровень этих фрагментов в кровотоке значительно превышает таковой в группе сравнения, а также в группе пациентов с удаленными метастазами. У последних отмечалось уменьшение уровня общих IgG, увеличение активности α₂-антиплазмина, а также сокращение протромбинового времени по сравнению с теми же показателями у пациентов без метастазов.

Введение. Для создания новых конъюгированных вакцин против Streptococcus pneumoniae необходимы капсульные полисахариды (КПС), свободные от примеси общего полисахаридного антигена пневмококков (ОПАП), поэтому изучение особенностей структуры КПС и разработка новых методов их выделения и очистки представляется важной проблемой.

Цель исследования - разработка нового метода выделения и очистки модифицированных КПС S. pneumoniae с остатком 2,5-ангидроманнозы на восстанавливающем конце (м-КПС), а также сравнительный анализ КПС и м-КПС с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и спектральных методов, изучение иммуногенности м-КПС в модели на животных и сопоставление кросс-реактивности сывороток к КПС и м-КПС.

Материал и методы. КПС S. pneumoniae выделяли из надклеточной жидкости с помощью ультрафильтрации и очищали обработкой нуклеазами и протеиназой К; м-КПС получали в результате реакции дезаминирования КПС. Строение полученных субстанций изучали с помощью ВЭЖХ и спектроскопии ¹Н-ядерного магнитного резонанса. Иммуногенность полученных препаратов оценивали по продукции специфических IgM- и IgG-антител у мышей в ответ на иммунизацию м-КПС.

Результаты. Получены очищенные от примеси ОПАП иммунологически активные препараты м-КПС S. pneumoniae с альдегидной группой на восстанавливающем конце, что позволяет использовать м-КПС для синтеза вакцинных м-КПС-содержащих конъюгатов.

Заключение. Разработанный метод получения очищенных от примеси ОПАП м-КПС S. pneumoniae позволяет получить физико-химически охарактеризованные и иммунологически активные препараты, что может привести к созданию новых пневмококковых вакцин, обладающих высокими иммунологическими характеристиками.

Введение. Разработка и использование подходов для анализа и выделения антиген-специфических клеток - это необходимый шаг к более глубокому пониманию механизмов иммунного ответа. Также он нужен для разработки новых терапевтических стратегий. На данный момент существует несколько подходов для определения и сортировки антиген-специфических клеток, которые имеют свои преимущества и недостатки, что позволяет подобрать оптимальный вариант для каждой задачи. Основной принцип всех методов основан на использовании лиганда Т-клеточного рецептора, который представляет собой комплекс МНС/пептид.

Цель исследования - описание различных подходов по прямому определению антиген-специфических клеток в практике разработок клеточных технологий.

Материал и методы. В качестве материала для исследований была использована периферическая кровь условно здоровых доноров. Для увеличения доли антиген-специфических клеток использовали разработанные в лаборатории протоколы стимуляции и клональной экспансии с помощью дендритных клеток. В качестве реагентов для определения антиген-специфических клеток использовали: тетрамеры для идентификации рецепторов, распознающих эпитоп NY-ESO-1; стрептамеры с пептидом белка HER2; мультимеры, сделанные на основе Flex-T мономеров, для рецепторов, распознающих эпитопы MAGE-A3; декстрамеры для определения клеток с рецепторами, распознающими эпитопы белков E6 и Е7 вируса папилломы человека. Все реагенты распознают эпитопы антигенов в комплексе с HLA-A*0201.

Результаты. Проведена оценка содержания антиген-специфических Т-лимфоцитов с использованием реагентов, полученных по четырем технологиям. Тетраметры с эпитопом NY-ESO-1 позволили эффективно оценить уровень экспрессии специфического рецептора после ретровирусной трансдукции мононуклеарных клеток. Для оценки биологических эффектов цитотоксических лимфоцитов использовали технологию стрептамеров с эпитопом белка HER2, что позволило не только анализировать антиген-специфические клетки, но и отсортировать чистую популяцию HER-2 специфических Т-лимфоцитов, которая показала цитотокcический ответ против клеток-мишеней. Технология Flex-T позволила получить мультимеры, конъюгированные с нужными пептидами, и подтвердила их эффективность для анализа и сортировки цитотоксических Т-лимфоцитов, специфичных к эпитопам белка MAGE-A3. Для использования в анализе транскриптома единичных клеток использовали технологию декстрамеров как молекул с эпитопами белков Е6 и Е7 ВПЧ, позволившую оценить клональность рецепторов в культуре с индукцией клональной экспансии.

Заключение. Мультимерное окрашивание - важный и ценный инструмент как для изучения формирования клеточного иммунного ответа, так и для разработки современных протоколов клеточной иммунотерапии онкологических, вирусных и аутоиммунных заболеваний, а также для оценки эффективности проводимой терапии. Существование ряда технологий позволяет выбрать необходимый инструмент для каждой задачи исследования.

Злокачественные новообразования представляют собой одну из основных причин смертности во всем мире. Несмотря на достижения в области традиционных методов лечения, таких как хирургия, лучевая и химиотерапия, эффективность этих подходов значительно снижается при наличии метастатических и рецидивирующих опухолей.

В последние годы иммунотерапия, в частности терапия клетками с химерными антигенными рецепторами (CAR), предлагает новый, многообещающий и персонализированный подход к лечению рака. CAR-T-терапия основана на генетической модификации Т-лимфоцитов пациента для экспрессии CAR, направленных против специфических опухолевых антигенов.

Несмотря на впечатляющие результаты, достигнутые в лечении гематологических злокачественных новообразований с помощью CAR-T-терапии, ее применение для лечения солидных опухолей сопряжено с рядом сложностей. Ключевыми препятствиями для внедрения CAR-T-терапии солидных опухолей являются проблемы доставки CAR-T-клеток в опухолевое микроокружение, локальная иммуносупрессия, а также гетерогенность опухоли. В данном обзоре рассматриваются стратегии, направленные на повышение эффективности и безопасности CAR-T-терапии при солидных опухолях.

Один из основных аспектов старения человеческого организма - развитие малоинтенсивного хронического воспаления, или воспалительного старения. Большое количество экспериментальных и эпидемиологических данных говорит о негативном влиянии воспалительного старения на физические и когнитивные показатели, а также на продолжительность жизни. Механизмы развития воспалительного старения разнообразны, они включают накопление стареющих (сенесцентных) клеток, нарушение эпигенетического контроля экспрессии генов, повышение проницаемости эпителиальных барьеров для иммуностимулирующих микробных субстанций, избыточное высвобождение эндогенных сигналов опасности, персистирующие инфекции, нарушение механизмов разрешения острого воспаления. По крайней мере некоторые эти механизмы объясняются в рамках теории антагонистической плейотропии. Актуальные задачи - разработка способов диагностики и персонализированной коррекции воспалительного старения.

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) остаются основной причиной смертности в Российской Федерации. Снижение показателей смертности от инсульта и инфаркта миокарда - приоритетная задача государства, для достижения которой Министерством здравоохранения Российской Федерации реализуются национальные и федеральные проекты. Применение эффективных и безопасных лекарственных методов лечения - это ключевой фактор сохранения жизни и здоровья пациентов. Одним из методов лечения, который позволяет снизить инвалидизацию и смертность в отдаленном периоде после сосудистой катастрофы, является тромболитическая терапия (ТЛТ). Для проведения ТЛТ применяются биотехнологические препараты на основе рекомбинантных белков. Иммуногенность лекарственных средств, действующим веществом которых является чужеродный белок, может стать причиной снижения клинической эффективности лечения, а также развития нежелательных реакций уже при первом введении. Таким образом, высокая иммуногенность препарата создает существенный риск здоровью и жизни пациентов и требует всесторонней оценки. В обзоре представлен анализ данных изучения иммуногенности наиболее часто применяемых в РФ препаратов для ТЛТ у пациентов с ишемическим инсультом и инфарктом миокарда.